EPZ005687

EPZ005687 zeigt eine konzentrationsabhängige Hemmung der PRC2-Enzymaktivität mit einem IC50-Wert von 54 nM. Es ist ein direkter Inhibitor der PRC2-Enzymaktivität und funktioniert nicht durch die Störung der Protein-Protein-Wechselwirkungen zwischen den PRC2-Untereinheiten. Diese Verbindung bindet in der SAM-Tasche der EZH2-SET-Domäne und ist ein SAM-kompetitiver Inhibitor der EZH2-Enzymaktivität. Die Affinität dieser Chemikalie ist ähnlich (innerhalb eines zweifachen Bereichs) für PRC2-Komplexe, die Wildtyp- und Tyr641-Mutanten-EZH2 enthalten, aber signifikant höhere Affinität für das A677G-Mutantenenzym (5,4-fach). Es reduziert die H3K27-Methylierung in verschiedenen Lymphomzellen. Es zeigt eine robuste Zellabtötung in heterozygoten Tyr641- oder Ala677-Mutantenzellen mit minimalen Auswirkungen auf die Proliferation von Wildtyp-Zellen. Diese Verbindung erhöht die G1-Phase des Zellzyklus mit korrelierenden Abnahmen in der S- sowie der G2/M-Phase. In einer Tyr641-Mutanten-Lymphomzelllinie kann sie zu einer Derepression bekannter EZH2-Zielgene führen und Gene beeinflussen, die spezifisch durch die EZH2 Tyr641-Mutante reprimiert werden. [1]

EPZ005687, ein selektiver Inhibitor der Methyltransferase EZH2, hemmt signifikant die Entwicklung von TAC-induzierter PAH auf eine EZH2-SOD1-ROS-abhängige Weise.

• Biochemische Enzymassays

  Die Verbindung wird 30 Minuten lang mit 40 μL pro Well von 5 nM PRC2 (finale Assay-Konzentration in 50 μL beträgt 4 nM) in 1x Assay-Puffer (20 mM Bicin [pH 7,6], 0,002 % Tween-20, 0,005 % Rinderhautgelatine und 0,5 mM DTT) inkubiert. 10 μL pro Well Substratmischung, bestehend aus Assay-Puffer, ³H-SAM, unmarkiertem SAM und einem Peptid, das die Histon-H3-Reste 21-44 mit C-terminalem Biotin (an ein C-terminales Amid-verkapptes Lysin angehängt) darstellt, werden hinzugefügt, um die Reaktion zu initiieren (beide Substrate sind in der endgültigen Reaktionsmischung in ihren jeweiligen Km-Werten vorhanden, ein Assay-Format, das als „ausgewogene Bedingungen“ bezeichnet wird). Die Endkonzentrationen der Substrate und der Methylierungszustand des Substratpeptids sind für jedes Enzym angegeben. Die Reaktionen werden 90 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert und mit 10 μL pro Well von 600 μM unmarkiertem SAM gestoppt, dann auf eine 384-Well-Flashplate übertragen und nach 30 Minuten gewaschen.

• Zelllinien

  OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer

• Konzentrationen

  ~10 μM

• Inkubationszeit

  11 days

• Methode

  Plating densities are determined for each cell line on the basis of linear log-phase growth. Cells are counted and split back to the original plating density in fresh medium with EPZ005687 on days 4 and 7.

• Tiermodelle

  Balb/c mice

• Dosierungen

  10 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.