Erlotinib (CP-358774)

Erlotinib HCl hemmt die EGFR-Aktivierung in intakten Zellen, einschließlich menschlicher HNS-Kopf- und Hals-Tumorzellen (IC50 20nM), DiFi-Darmkrebszellen und MDA MB-468-Brustkrebszellen. Diese Verbindung (1 μM) induziert Apoptose in menschlichen DiFi-Darmkrebszellen. [1] Sie hemmt das Wachstum einer Reihe von NSCLC-Zelllinien, einschließlich A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 mit IC50-Werten von 29 nM bis >20 μM. [2] Diese Chemikalie (2 μM) hemmt signifikant das Wachstum von AsPC-1- und BxPC-3-Pankreaszellen. [3] Die Wirkungen dieser Verbindung in Kombination mit Gemcitabin werden bei KRAS-mutierten Pankreaskrebszellen als additiv betrachtet. Zehn Mikromolar dieser Chemikalie hemmt die EGFR-Phosphorylierung an den Stellen Y845 (Src-abhängige Phosphorylierung) und Y1068 (Autophosphorylierung). [4] Die Kombination mit dieser Verbindung könnte die Rapamycin-stimulierte Akt-Aktivität herabregulieren und einen synergistischen Effekt auf die Zellwachstumshemmung erzielen. [5]

Bei Dosen von 100 mg/kg verhindert Erlotinib HCl die EGF-induzierte Autophosphorylierung von EGFR in menschlichen HN5-Tumoren, die als Xenotransplantate in athymischen Mäusen wachsen, und des hepatischen EGFR der behandelten Mäuse vollständig. [1] Diese Verbindung (100 mg/Kg) hemmt die Tumormodelle H460a und A549 mit einer Hemmrate von 71 bzw. 93 %. [5]

• Kinase-Assays

  96-Well-Platten werden über Nacht bei 37 °C mit 100 μL pro Well 0,25 mg/mL PGT in PBS beschichtet. Überschüssiges PGT wird durch Absaugen entfernt und die Platte wird 3 Mal mit Waschpuffer (0,1 % Tween 20 in PBS) gewaschen. Die Kinase-Reaktion wird in 50 μL 50 mM HEPES (pH 7,3) durchgeführt, das 125 mM Natriumchlorid, 24 mM Magnesiumchlorid, 0,1 mM Natriumorthovanadat, 20 μM ATP, 1,6 μg/mL EGF und 15 ng EGFR enthält, affinitätsgereinigt aus A431-Zellmembranen. Erlotinib HCl in DMSO wird hinzugefügt, um eine endgültige DMSO-Konzentration von 2,5 % zu erreichen. Die Phosphorylierung wird durch Zugabe von ATP initiiert und 8 Minuten lang bei Raumtemperatur unter ständigem Schütteln fortgesetzt. Die Kinase-Reaktion wird durch Absaugen des Reaktionsgemisches beendet und 4 Mal mit Waschpuffer gewaschen. Phosphoryliertes PGT wird durch 25-minütige Inkubation mit 50 μL pro Well HRP-konjugiertem PY54 Anti-Phosphotyrosin-Antikörper gemessen, der in Blockierungspuffer (3 % BSA und 0,05 % Tween 20 in PBS) auf 0,2 μg/mL verdünnt wurde. Der Antikörper wird durch Absaugen entfernt und die Platte 4 Mal mit Waschpuffer gewaschen. Das kolorimetrische Signal wird durch Zugabe von TMB Microwell Peroxidase Substrate, 50 μL pro Well, entwickelt und durch Zugabe von 0,09 M Schwefelsäure, 50 μL pro Well, gestoppt. Phosphotyrosin wird durch Messung der Absorption bei 450 nm geschätzt. Das Signal für Kontrollen beträgt typischerweise 0,6-1,2 Absorptions-Einheiten, mit im Wesentlichen keinem Hintergrund in Wells ohne AlP, EGFR oder PGT und ist proportional zur Inkubationszeit von 10 Minuten.

• Zelllinien

  A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 cells

• Konzentrationen

  30 nM-20 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Exponentially growing cells are seeded in 96-well plastic plates and exposed to serial dilutions of erlotinib, pemetrexed, or the combination at a constant concentration ratio of 4:1 in triplicates for 72 h. Cell viability is assayed by cell count and the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Growth inhibition is expressed as the percentage of surviving cells in drug-treated versus PBS-treated control cells (which is considered as 100% viability). The IC50 value is the concentration resulting in 50% cell growth inhibition by a 72-h exposure to this compound compared with untreated control cells and is calculated by the CalcuSyn software.

• Tiermodelle

  Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC cells

• Dosierungen

  50 mg/kg

• Verabreichung

  Oral administration