Etoposide

Etoposide hemmt die DNA-Synthese durch die Bildung eines Komplexes mit Topoisomerase II und DNA, der Brüche in der doppelsträngigen DNA induziert und die Reparatur durch die Bindung von Topoisomerase II verhindert. Akkumulierte DNA-Brüche verhindern den Eintritt in die mitotische Phase der Zellteilung und führen zum Zelltod. Diese Verbindung wirkt hauptsächlich in der G2- und S-Phase des Zellzyklus. [1] Sie hemmt das Wachstum der murinen Angiosarkomzelllinie (ISOS-1) über einen Zeitraum von 5 Tagen mit einer IC50 von 0,25 μg/mL. Das Zellwachstum normaler muriner mikrovaskulärer Endothelzellen (mECs) ist weniger empfindlich gegenüber dieser Chemikalie mit einer IC50 von 10 μg/mL. [2] Dieses Mittel hemmt nach 6-stündiger Behandlung Kolonien der tetraploiden Variante der menschlichen leukämischen Lymphoblastenlinie CCRF-CEM mit einer IC50 von 0,6 μM. [3] Nach 2-stündiger Behandlung hemmt es das Wachstum der menschlichen Bauchspeicheldrüsenkrebszelllinien Y1, Y3, Y5, Y19, YM, YS und YT mit IC50-Werten von 300 μg/mL, 300 μg/mL, 300 μg/mL, 91 μg/mL, 0,68 μg/mL, 300 μg/mL, 300 μg/mL bzw. 260 μg/mL. [4] Diese Verbindung hemmt nach 1-stündiger Exposition das Wachstum menschlicher Gliomzelllinien CL5, G142, G152, G111 und G5 mit IC50-Werten von 8, 9, 9,8, 10 bzw. 15,8 μg/mL über 12 Tage. Unter denselben Bedingungen wird der IC90-Wert in den Zelllinien CL5, G152, G142 und G111 bei 26, 27, 32 bzw. 33 μg/mL erreicht. Die Hemmung der Topoisomerase II ist für jede Zelle homogen. Die durchschnittlichen Hemmraten betragen 15%, 21,8%, 31,8%, 41,5% und 49,5% für 1, 2, 4, 8 bzw. 16 μg dieses Mittels. [5]

Etoposide, als Einzelwirkstoff verabreicht, erwies sich bei vielen Xenograft-Wachstumsmodellen als ineffektiv, wie z.B. bei heterotransplantierten Hepatoblastomen NMHB1 und NMHB 2, [6] menschlichem Neuroblastom-Xenograft, [7] und menschlichem Gastrointestinalkrebs-Xenograft, [8] während eine Dosis von 10 mg/kg i.p. dieser Verbindung murine Angiosarkom-Zell-ISOS-1-Tumoren bei 36% der Kontrollen hemmt. [2] Diese Chemikalie induziert Tumorummunität bei Lewis-Lungenkrebs. Eine einmalige Verabreichung von 50 mg/kg dieses Mittels i.p. induziert eine 60%ige Überlebensrate von C57B1/6-Mäusen, denen Lewis-Lungenkrebszellen (3LL) injiziert wurden, über 60 Tage. Etwa 40% dieser überlebenden Mäuse lehnen eine spätere Herausforderung mit 3LL ab, während keine der Kontrollmäuse länger als 30 Tage überlebt. 3LL-Zellen, die eine 90% tödliche Konzentration dieser Verbindung in vitro überlebt haben, töten 75% der Empfängermäuse, aber 60% der überlebenden Mäuse lehnen eine Herausforderung mit 3LL ab. Splenozyten, die von Tumor abstoßenden Mäusen geerntet wurden, schützen naive Mäuse, denen 3LL injiziert wurde. [9]

• Topoisomerase II Aktivitätsassay

  Kernextrakte werden hergestellt und die Kerne isoliert. Die Aktivität der Topoisomerase II wird aus dem erhaltenen Prozentsatz der Dekatenierung berechnet. Tritiiertes Kinetoplasten-DNA (KDNA 0,22 μg) wird als Substrat verwendet. Etoposide und Topoisomerase II werden 30 Minuten bei 37 ℃ inkubiert und mit 1% Natriumdodecylsulfat (SDS) und Proteinase K (100 μg/mL) gestoppt. Die Prozentsätze der Dekatenierung und der Hemmung der Topoisomerase II durch diese Verbindung werden ermittelt.

• Zelllinien

  Human glioma cell lines CL5

• Konzentrationen

  80 μg/mL

• Inkubationszeit

  1 hour

• Methode

  After the Etoposide treatment, cells are removed from the dish with phosphate-buffered saline (PBS) containing 0.03% trypsin and 0.27 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and are diluted into culture dishes in appropriate numbers to yield between 20 and 200 colonies. After 12 days, cultures are fixed with methanol-acetic acid, stained with crystal violet, and scored for colonies containing more than 50 cells. The standard errors are typically less than 15% of the mean value unless otherwise stated.

• Tiermodelle

  Murine angiosarcoma xenografts ISOS-1

• Dosierungen

  10 mg/kg

• Verabreichung

  i.p. every day for 5 days from day 7