Fostamatinib disodium hexahydrate

R788 ist ein Prodrug des Milztyrosinkinase (Syk)-Inhibitors R406. R788 ist ein kompetitiver Inhibitor der ATP-Bindung mit einem Ki von 30 nM. R788 hemmt dosisabhängig die Anti-IgE-vermittelte CHMC-Degranulation mit einer EC50 von 56 nM. R788 hemmt auch die Anti-IgE-induzierte Produktion und Freisetzung von LTC4 sowie Zytokinen und Chemokinen, einschließlich TNFα, IL-8 und GM-CSF. Die Hemmung von Syk durch R788 führt zur Hemmung aller Phosphorylierungsereignisse, die nach der Syk-Signalgebung auftreten. Neben der FcϵRI-Signalgebung in CHMC hemmt R788 am stärksten die Signalgebung der IL-4- und IL-2-Rezeptoren. R788 hemmt spezifisch die FcγR-Signalgebung in menschlichen Mastzellen, Makrophagen und Neutrophilen. R788 kann lokale entzündliche Verletzungen, die durch Immunkomplexe vermittelt werden, hemmen.[1] R788 induziert die Apoptose der Mehrheit der untersuchten DLBCL-Zelllinien. In R788-sensitiven DLBCL-Zelllinien hemmt R788 spezifisch sowohl die tonische als auch die Liganden-induzierte BCR-Signalgebung (Autophosphorylierung von SYK525/526 und SYK-abhängige Phosphorylierung des B-Zell-Linkerproteins [BLNK]).[2]

Die orale Verabreichung von R788 an Mäuse reduziert die immunkomplexvermittelte Entzündung in einer reversen passiven Arthus-Reaktion und zwei Antikörper-induzierten Arthritismodellen.[1] In einer anderen Studie hemmt R788 die BCR-Signalgebung in vivo wirksam, was zu einer reduzierten Proliferation und Überleben der malignen B-Zellen führt und das Überleben der behandelten Tiere signifikant verlängert.[3] R788 zeigt eine signifikante Reduzierung wichtiger Entzündungsmediatoren wie TNFalpha, IL-1, IL-6 und IL-18, was zu einer reduzierten Entzündung und Knochendegradation in Modellen der rheumatoiden Arthritis führt.[4]

• Fluoreszenzpolarisationstests für Kinasen und K_i-Bestimmung

  Die Fluoreszenzpolarisationsreaktionen werden durchgeführt. Für die K_i-Bestimmung werden doppelte 200-μL-Reaktionen bei acht verschiedenen ATP-Konzentrationen ab 200 μM (2-fache serielle Verdünnungen) in Gegenwart von entweder DMSO oder R788 bei 125, 62,5, 31,25, 15,5 oder 7,8 nM angesetzt. Zu verschiedenen Zeitpunkten werden 20 μL jeder Reaktion entnommen und gequencht, um die Reaktion zu stoppen. Für jede Konzentration von R788 wird die Reaktionsgeschwindigkeit bei jeder ATP-Konzentration bestimmt und gegen die ATP-Konzentration aufgetragen, um die scheinbaren K_m und V_max zu bestimmen. Schließlich wird der scheinbare K_m (oder scheinbare K_i/V_max) gegen die Inhibitorkonzentration aufgetragen, um den K_i zu bestimmen.

• Zelllinien

  Cultured human mast cells (CHMC)

• Konzentrationen

  0-100 μM

• Inkubationszeit

  0.5 h

• Methode

  Cultured human mast cells (CHMC) are derived from cord blood CD34⁺ progenitor cells and grown, primed, and stimulated and shown in supplemental data. Before stimulation, cells are incubated with R788 or DMSO for 30 minutes. Cells are then stimulated with either 0.25 to 2 mg/mL anti-IgE or anti-IgG or 2 μM ionomycin. For tryptase measurement, ~1500 cells per well are stimulated for 30 min in modified Tyrode's buffer. For LTC4 and cytokine production, 100,000 cells per well are stimulated for 1 or 7 hours, respectively. Tryptase activity is measured by luminescence readout of a peptide substrate, and LTC4 and cytokines are measured using Luminex multiplex technology.

• Tiermodelle

  Balb/c mice with arthritis

• Dosierungen

  1 mg/kg or 5 mg/kg

• Verabreichung

  o.g.