Golvatinib (E7050)

Katalog-Nr.S2859 Charge:S285901

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Technische Daten

Formel

C33H37F2N7O4
Molekulargewicht 633.69 CAS-Nr. 928037-13-2
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 20 mg/mL (31.56 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
30%propylene glycol 5%Tween80 65%D5W

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 30.000mg/ml (47.34mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified propylene glycol stock solution to 50 μL of Tween 80, mix evenly to clarify it; then continue to add 650 μL of D5W to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Golvatinib (E7050) ist ein dualer c-Met- und VEGFR-2-Inhibitor mit einer IC50 von 14 nM bzw. 16 nM. Diese Verbindung hemmt nicht das bFGF-stimulierte HUVEC-Wachstum (bis zu 1000 nM) und befindet sich derzeit in Phase-1/2-Studien.
Ziele
c-Met VEGFR2
14 nM 16 nM
In vitro In-vitro-Studien zeigen, dass Golvatinib (E7050) die Phosphorylierung von sowohl c-Met als auch VEGFR-2 stark hemmt. Es unterdrückt auch stark das Wachstum von c-Met-amplifizierten Tumorzellen und Endothelzellen, die entweder mit HGF oder VEGF stimuliert wurden. Diese Verbindung umgeht die Resistenz gegen alle reversiblen, irreversiblen und mutationsselektiven EGFR-TKIs, die durch exogenes und/oder endogenes HGF in EGFR-mutierten Lungenkrebszelllinien induziert werden, indem sie den Met/Gab1/PI3K/Akt-Signalweg in vitro blockiert. Es verhindert auch das Auftreten von Gefitinib-resistenten HCC827-Zellen, die durch kontinuierliche Exposition gegenüber HGF induziert werden.
In vivo Golvatinib (E7050) zeigt in vivo eine Hemmung der Phosphorylierung von c-Met und VEGFR-2 in Tumoren, mit einer starken Unterdrückung des Tumorwachstums und der Angiogenese in Xenograft-Modellen. Die Behandlung einiger Tumorlinien mit c-Met-Amplifikationen mit hohen Dosen dieser Verbindung (50–200 mg/kg) induziert Tumorrückbildung und -verschwinden. In einem Modell der peritonealen Dissemination zeigt es eine Antitumorwirkung gegen peritoneale Tumoren sowie eine signifikante Verlängerung der Lebensdauer bei behandelten Mäusen. In einer weiteren Xenograft-Studie sind Tumoren, die durch HGF-transfizierte Ma-1 (Ma-1/HGF)-Zellen erzeugt wurden, angiogener als Vektor-Kontrolltumoren und zeigen eine Resistenz gegen ZD1839. E7050 allein hemmt die Angiogenese und verzögert das Wachstum von Ma-1/HGF-Tumoren, und in Kombination mit ZD1839 induziert es eine ausgeprägte Regression des Tumorwachstums.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Western-Blot-Analyse

    Der Phosphorylierungsstatus von c-Met und VEGFR-2 wird mittels Western-Blot-Analyse nachgewiesen. Für c-Met werden MKN45-Zellen mit einer seriellen Verdünnung von Golvatinib (E7050) in komplettem Medium bei 37 °C für 2 h inkubiert. Für VEGFR-2 werden HUVEC 24 h lang in humanem endothelialem serumfreiem Medium mit 0,5 % FBS ausgehungert. Anschließend werden HUVEC 1 h lang mit einer seriellen Verdünnung dieser Verbindung inkubiert und danach 5 min lang mit 20 ng/mL humanem VEGF inkubiert. Die Zellen werden mit Lysepuffer (50 mM HEPES [pH 7,4], 150 mM NaCl, 10 % Glycerin, 1 % Triton X-100, 1,5 mM MgCl2, 1 mM EDTA [pH 8,0], 100 mM NaF, 1 mM Phenylmethylsulfonylfluorid, 1 mM Natriumorthovanadat, 10 μg/mL Aprotinin, 50 μg/mL Leupeptin und 1 μg/mL Pepstatin A) lysiert. Die resezierten Tumorproben werden mit Lysepuffer, der 25 mM β-Glycerophosphat und 0,5 % (v/v) Phosphataseinhibitor-Cocktail 2 enthält, bei 4 °C homogenisiert. Zellulärer Abfall wird durch Zentrifugation bei 17 860 g für 20 min bei 4 °C entfernt. Aliquots der Überstände, die 5-20 μg Protein enthalten, werden unter reduzierenden Bedingungen der SDS-PAGE unterzogen. Die Proteine werden dann auf PVDF-Membranen transferiert, die mit TBS, das 0,05 % Tween-20 und entweder 5 % Magermilch oder 5 % BSA enthält, blockiert werden. Die Membranen werden mit folgenden Antikörpern inkubiert: polyklonaler Anti-c-Met-Antikörper (C-28) und polyklonaler Anti-VEGFR-2-Antikörper (C-20); monoklonaler Anti-Phosphotyrosin-Antikörper Klon 4G10; und polyklonaler Anti-VEGFR-2-Antikörper, polyklonaler Anti-Phospho-VEGFR-2 (Tyr996)-Antikörper und polyklonaler Anti-Phospho-c-Met (Tyr1234/1235)-Antikörper. Der Nachweis erfolgt mit einem Super Signal Enhanced Chemiluminescence Kit. Immunoreaktive Banden werden durch Chemilumineszenz mit einem Image Master-VDS-CL-Detektionssystem visualisiert. Die Intensität jeder Bande wird mittels eines Bildanalysegeräts gemessen.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    MKN45, EBC-1, Hs746T, SNU-5, A549, SNU-1 and MKN74

  • Konzentrationen

    5-5000 nM

  • Inkubationszeit

    3 days

  • Methode

    Cells (1–3 × 103 cells/100 μL/well) are seeded on 96-well culture plates with various concentrations of Golvatinib (E7050) and cultured for 3 days. Then, 10 μL of WST-8 reagent is added to each well, and absorbance is measured at 450 nm compared with a reference measurement at 660 nm using a MTP-500 microplate reader. HUVEC (2 × 103 cells/well) are cultured for 3 days in medium containing HGF (30 ng/mL), VEGF (20 ng/mL), or basic fibroblast growth factor (bFGF) (20 ng/mL) together with serially diluted this compound.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Subcutaneous xenograft models

  • Dosierungen

    50–200 mg/kg

  • Verabreichung

    orally once a day

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19832844/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22317763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22789825/

Kundenproduktvalidierung

PC-9/LMC-GR cells (2 × 105 cells/well) were incubated in 6-well plates with various concentrations of gefitinib with or without crizotinib (1 μmol/L) or golvatinib (1 μmol/L) for 1 hour. Cell lysate were obtained and subjected to immunoblotting with antibodies toward the indicated molecules.

Daten von [ , , Mol Cancer Ther, 2017, 16(3):506-515 ]

B, PC-9/LMC-GR cells (2 × 105 cells/well) were incubated in 6-well plates with various concentrations of gefitinib with or without crizotinib (1 μmol/L) or golvatinib (1 μmol/L) for 1 hour. Cell lysate were obtained and subjected to immunoblotting with antibodies toward the indicated molecules.

Daten von [ , , Mol Cancer Ther, 2017, 16(3):506-515 ]

SBC-5, DMS273, and DMS273-G3H cells were treated with either 1 lM crizotinib or golvatinib for 2 h. Cell lysates were evaluated for protein expression by Western blot analysis. Three independent experiments were carried out, and a representative result is shown. p, phosphorylated.

Daten von [ , , Cancer Sci, 2017, 108(7):1378-1385 ]

Sellecks Golvatinib (E7050) Wurde zitiert von 8 Publikationen

E7050 Suppresses the Growth of Multidrug-Resistant Human Uterine Sarcoma by Inhibiting Angiogenesis via Targeting of VEGFR2-Mediated Signaling Pathways [ Int J Mol Sci, 2023, 24(11)9606] PubMed: 37298555
Blockade of c-Met-Mediated Signaling Pathways by E7050 Suppresses Growth and Promotes Apoptosis in Multidrug-Resistant Human Uterine Sarcoma Cells [ Int J Mol Sci, 2022, 23(23)14884] PubMed: 36499211
MET amplification results in heterogeneous responses to osimertinib in EGFR-mutant lung cancer treated with erlotinib [ Cancer Sci, 2020, 111(10):3813-3823] PubMed: 32735723
Diverse Receptor Tyrosine Kinase Phosphorylation in Urine-Derived Tubular Epithelial Cells from Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease Patients [ Nephron, 2020, 1-12] PubMed: 32799196
LECT2, a Ligand for Tie1, Plays a Crucial Role in Liver Fibrogenesis [ Cell, 2019, 178(6):1478-1492] PubMed: 31474362
MET Copy Number Gain Is Associated with Gefitinib Resistance in Leptomeningeal Carcinomatosis of EGFR-mutant Lung Cancer [Nanjo S Mol Cancer Ther, 2017, 16(3):506-515] PubMed: 28138027
Impact of MET inhibition on small-cell lung cancer cells showing aberrant activation of the hepatocyte growth factor/MET pathway. [Taniguchi H, et al. Cancer Sci, 2017, 108(7):1378-1385] PubMed: 28474864
In vivo imaging xenograft models for the evaluation of anti-brain tumor efficacy of targeted drugs [Kita K Cancer Med, 2017, 6(12):2972-2983] PubMed: 29125233

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