Entospletinib (GS-9973)

Entospletinib (GS-9973) zeigt in vitro eine gute bidirektionale Permeabilität über Caco-2-Zellmonoschichten. In Zellen weist es auch eine ausgezeichnete Selektivität für Syk auf und hemmt potent die BCR-vermittelte Aktivierung und Proliferation von B-Zellen sowie die durch Immunkomplexe stimulierte Zytokinproduktion in Monozyten. [1] Die Kombination dieser Verbindung hemmt synergistisch die Lebensfähigkeit von CLL-Zellen und stört die Chemokinsignalisierung weiter. [2]

Entospletinib (GS-9973) (1 mg/kg p.o.) zeigt eine moderate bis hohe Bioverfügbarkeit bei Ratten und Hunden. In einem Rattenmodell für kollageninduzierte Arthritis hemmt es (1–10 mg/kg p.o.) signifikant die Knöchelinflammation. Darüber hinaus zeigt diese Verbindung auch krankheitsmodifizierende Aktivität bei mehreren histologischen Messungen, einschließlich der Hemmung der Pannusbildung, des Knorpelschadens, der Knochenresorption und der periostalen Knochenbildung mit ED50-Werten von 1,2 bis 3,9 mg/kg. [1]

• Kinase-Assays

  Die Kinaseaktivität der Baculovirus-exprimierten Syk-Kinase in voller Länge wird in einem Lance-basierten Assayformat in einem Endvolumen von 25 μL gemessen, das 25 mM Tris–HCl, pH 7,5, 5 mM β-Glycerophosphat, 2 mM DTT, 0,1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 0,5 μM Promega PTK biotinyliertes Peptidsubstrat 1, 0,01 % Casein, 0,01 % Triton X-100 und 40 mM ATP (Km für ATP) enthält und 60 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert wird. Reaktionen werden durch Zugabe von 30 mM EDTA, das 30 μL SA-APC und 4 nM PT-66-Antikörper enthält, gestoppt und die Platten auf einem Perkin-Elmer Envision gemessen. IC50-Werte für Entospletinib (GS-9973) werden mithilfe eines Vier-Parameter-Linearregressionsalgorithmus bestimmt.

• Zelllinien

  MV-4-11 cells

• Konzentrationen

  ~10 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Functional impact on cellular Flt3 activity is determined by measuring the inhibition of MV-4-11 cell proliferation by Entospletinib (GS-9973). A total of 104 cells are diluted in RPMI medium containing 10% FBS in 96-well flat-bottomed tissue culture plates and incubated with compound dilutions for 72 h at 37 癈. Alamar blue (10%) is added to the cells, which were incubated for an additional 12-18 h at 37 癈, and inhibition of the relative cell numbers is determined by spectrophotometer readings at 570/600 nm.

• Tiermodelle

  Rat Collagen-Induced Arthritis (CIA) Model

• Dosierungen

  ~10 mg/kg bid

• Verabreichung

  p.o.