GSK-J4 Hydrochloride

Katalog-Nr.S7070 Charge:S707004

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Technische Daten

Formel

C24H27N5O2.HCl
Molekulargewicht 453.96 CAS-Nr. 1797983-09-5
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 90 mg/mL (198.25 mM)
Ethanol 90 mg/mL (198.25 mM)
Water 10 mg/mL (22.02 mM)
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung GSK J4 HCl ist ein zellgängiges Prodrug von GSK J1, dem ersten selektiven Inhibitor der H3K27 histone demethylase JMJD3 und UTX mit einer IC50 von 60 nM in einem zellfreien Assay und inaktiv gegen eine Reihe von Demethylasen der JMJ-Familie.
Ziele
JMJD3
(Cell-free assay)
60 nM
In vitro

GSK J4 HCl ist ein Ethylester-Derivat des JMJD3-selektiven Histon-Demethylase-Inhibitors GSK-J1 mit einem IC50-Wert von mehr als 50 μM in vitro. Diese Verbindung wird verwendet, um die Folgen der Demethylierung von H3K27me3 zu untersuchen. In menschlichen primären Makrophagen hemmt diese Chemikalie die Lipopolysaccharid-induzierte Produktion von Zytokinen, einschließlich des proinflammatorischen Tumornekrosefaktors (TNF). Darüber hinaus verhindert es den Lipopolysaccharid-induzierten Verlust von H3K27me3, der mit den TNF-Transkriptionsstartstellen assoziiert ist, und blockiert die Rekrutierung der RNA-Polymerase II.

In vivo

GSK-J4 hydrochloride ist ein potenter dualer Inhibitor der H3K27me3/me2-Demethylasen JMJD3/KDM6B und UTX/KDM6A. Es hemmt die LPS-induzierte TNF-α-Produktion in menschlichen primären Makrophagen. Diese Verbindung ist ein zellgängiges Prodrug von GSK-J1.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Histon-Demethylase AlphaScreen

    Die Hemmung von Histon-Demethylasen wird mithilfe des Histon-Demethylase-AlphaScreen-Assays (Amplified Luminescence Proximity Homogenous Assay) beurteilt. Dieser Assay verwendet ein biotinyliertes Peptidsubstrat und basiert auf dem Nachweis des Produktmethylierungszeichens mithilfe eines spezifischen Antikörpers, der an Protein-A-Akzeptor-Beads gekoppelt ist, und einer Streptavidin-Donor-Bead zum Einfangen des Peptids. Kurz gesagt, rekombinante Demethylase-Enzyme werden in Gegenwart von Fe2+ in Form von Eisenammoniumsulfat (FAS), α-Ketoglutarat (KG) und biotinyliertem Peptidsubstrat inkubiert. L-Ascorbinsäure wird hinzugefügt, um ein reduzierendes Milieu zu schaffen und die Oxidation von Fe2+ zu verhindern. Nach der Inkubation mit Peptidsubstrat wird das Vorhandensein des Produkts mithilfe der AlphaScreen-Technologie nachgewiesen. Die Demethylase-AlphaScreen-Assays werden im 384-Well-Plattenformat unter Verwendung von weißen Proxiplatten durchgeführt. Alle Schritte werden in Assay-Puffer (50 mM HEPES pH 7,5, 0,1 % (w/v) BSA und 0,01 % (v/v) Tween-20) durchgeführt. FAS wird jeden Tag frisch in 20 mM HCl auf eine Konzentration von 400 mM gelöst und in entionisiertem Wasser auf 1,0 mM verdünnt. Alle anderen Komponenten werden jeden Tag frisch in entionisiertem Wasser gelöst. Für IC50-Bestimmungen werden 5 μL Assay-Puffer, der Demethylase-Enzym enthält, in die Vertiefungen einer 384-Well-Proxiplatte überführt. Titrationen dieser Verbindung (0,1 μL) werden in jede Vertiefung überführt und die Enzyme 15 Minuten lang mit dieser Chemikalie vorinkubiert (die endgültige DMSO-Konzentration beträgt 1 %). Die Enzymreaktion wird durch Zugabe von 5 μL eines Substratmischung, bestehend aus α-KG, FAS, L-Ascorbinsäure und biotinyliertem Peptidsubstrat, initiiert und die Reaktion für die angegebene Zeit bei Raumtemperatur inkubiert. Die Enzymreaktion wird nach der angegebenen Zeit durch Zugabe von 5 μL EDTA (7,5 mM Endkonzentration im Assay-Puffer) gestoppt. Streptavidin-Donor-Beads (0,08 mg/ml) und Protein-A-konjugierte Akzeptor-Beads (0,08 mg/ml) werden 1 Stunde lang mit einem Antikörper gegen die Produktmethylierungsmarkierung vorinkubiert und das Vorhandensein von Biotin-H3-Produkt wird durch Zugabe von 5 μL der vorinkubierten AlphaScreen-Beads nachgewiesen (Endkonzentrationen von 0,02 mg/ml bezogen auf Akzeptor- und Donor-Beads). Der Nachweis erfolgt 1 Stunde lang bei Raumtemperatur und die Assay-Platten werden in einem BMG Labtech Pherastar FS Plattenlesegerät ausgelesen. Die Daten werden auf die enzymfreie Kontrolle normiert und die IC50 aus der nichtlinearen Regressionskurvenanpassung mit GraphPad Prism 5 bestimmt.
Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    Mouse podocytes

  • Konzentrationen

    5 μM

  • Inkubationszeit

    48 h

  • Methode

    Cells were serum starved for 4 hours, followed by treatment with EPZ-6438 (10 μM) or this compound (5 μM) for 48 hours.
Tierstudie:

[2]
  • Tiermodelle

    BALB/c mice

  • Dosierungen

    10 mg/kg

  • Verabreichung

    i.p.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22842901/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29227285/

Kundenproduktvalidierung

<p>DIPG cells were seeded into 96-well plates and treated with panobinostat and GSK-J4 individually or in combination at the indicated concentrations for 72 hr in at least triplicate. Cell viabilities were then assessed using the CelltiterGlo assay relative to 0.1% DMSO control. Data shown as mean ± SD. *indicates the two drugs demonstrate synergy at that condition (i.e. CI < 1).</p>

, , Nat Med, 2015, 21(6):555-9.

<p>GSK-J4 impaired hair cell regeneration after neomycin damage. (A–D) GSK-J4 reduced the numbers of GFP-positive (green) and FM1-43FX-positive (red) hair cells compared with DMSO-treated controls. Scale bars = 10 μm. (E,F) Quantitative analysis of the number of GFP-positive (E) or FM1-43FX-positive (F) hair cells per neuromast (NM) at different time points in DMSO-treated control and GSK-J4-treated larvae. In the 24-h group, n = 40 neuromasts (20 larvae) per group; in the 48-h group, n = 28 neuromasts (14 larvae) per group. ***p < 0.0001. Bars are mean ± sem. [24-h group: One-way ANOVA; GFP-positive cells: F(2, 117) = 96.94; FM1-43FX-positive cells: F(2, 117) = 114. 48-h group: One-way ANOVA; GFP-positive cells: F(2, 81) = 88.96; FM1-43FX-positive cells: F(2, 81) = 93.85].</p>

, , Front Mol Neurosci, 2017, doi: 10.3389/fnmol.2017.00051

Inhibition of JMJD3 mitigated the IL-1β-induced inflammatory response in the MH7A cells. The MH7A cells were transfected with control or JMJD3 siRNA or treated with the indicated concentrations of GSK-J4 (JMJD3 inhibitor) and were then stimulated with IL-1β for 24 h. Western blot analysis of JMJD3, TLR2, COX-2 and GAPDH expression (d).

Daten von [ , , Cell Mol Immunol, 2018, doi:10.1038/s41423-018-0037-8 ]

GSK J4 inhibited PDGF-induced cyclin D1 and PCNA expression. The cells were preincubated for 4 h, with or without 10 mM GSK J4, followed by stimulation with 25 ng/ml PDGF-BB for 36 h. Cells were immunostained with anti-JMJD3 antibodies (green), and nuclei were stained with DAPI (blue) and analyzed by fluorescence microscopy.

Daten von [ , , FASEB J, 2018, 32(7):4031-4042 ]

Sellecks GSK-J4 Hydrochloride Wurde zitiert von 65 Publikationen

HIF-independent oxygen sensing via KDM6A regulates ferroptosis [ Mol Cell, 2025, 85(15):2973-2987.e6] PubMed: 40712585
Loss of Kmt2c or Kmt2d drives brain metastasis via KDM6A-dependent upregulation of MMP3 [ Nat Cell Biol, 2024, 26(7):1165-1175] PubMed: 38926506
Evi1 governs Kdm6b-mediated histone demethylation to regulate the Laptm4b-driven mTOR pathway in hematopoietic progenitor cells [ J Clin Invest, 2024, 134(24)e173403] PubMed: 39680456
Targeting lysine demethylase 6B ameliorates ASXL1 truncation-mediated myeloid malignancies in preclinical models [ J Clin Invest, 2024, 134(1)e163964] PubMed: 37917239
Refractory testicular germ cell tumors are highly sensitive to the targeting of polycomb pathway demethylases KDM6A and KDM6B [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):528] PubMed: 39482699
Dual targeting of histone deacetylases and MYC as potential treatment strategy for H3-K27M pediatric gliomas [ Elife, 2024, 13RP96257] PubMed: 39093942
Prenatal dexamethasone exposure reduces osteoprogenitor proliferation in mice via histone modifications at the Mkp-1 gene locus [ Commun Biol, 2024, 7(1):1589] PubMed: 39609620
Targeting histone demethylases JMJD3 and UTX: selenium as a potential therapeutic agent for cervical cancer [ Clin Epigenetics, 2024, 16(1):51] PubMed: 38576048
miRNA-27a-3p is involved in the plasticity of differentiated hepatocytes [ Gene, 2024, 913:148387] PubMed: 38499211
Refractory testicular germ cell tumors are highly sensitive to the targeting of polycomb pathway demethylases KDM6A and KDM6B [ Res Sq, 2024, rs.3.rs-4986186] PubMed: 39483904

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