GSK2334470

GSK2334470 hemmt PDK1 daran, Akt1 in voller Länge in Gegenwart von PtdIns(3,4,5)P₃-haltigen Lipidvesikeln oder einer Mutante von Akt1, der die PH-Domäne fehlt (ΔPH-Akt1), mit einer IC50 von ~10 nM zu aktivieren. Diese Verbindung hemmt PDK1 auch ähnlich daran, das PDKtide-Peptidsubstrat mit einer IC50 von ~10 nM zu phosphorylieren. Es (0,1 μM–0,3 μM) induziert eine signifikante dosisabhängige Hemmung von endogenem NDRG1 mit über 50 % Reduktion der Phosphorylierung in HEK-293-Zellen. Diese Chemikalie (30 nM) induziert eine signifikante dosisabhängige Hemmung der T-Loop-Phosphorylierung jeder SGK-Isoform in HEK-293-Zellen. Es (1 μM) hemmt die hydrophobe Motiv-Phosphorylierung von S6K1 in ähnlichem Maße wie die T-Loop-Phosphorylierung in HEK-293-Zellen. Diese Verbindung (3 μM) unterdrückt auch die S6K1-Aktivität und -Phosphorylierung, die durch IGF1-Stimulation von serumdeprivierten HEK-293-Zellen induziert wird. Es (3 μM) hemmt die Phosphorylierung mehrerer Akt-Substrate [FoxO (forkhead box O), GSK3 und PRAS40] erheblich. Diese Chemikalie (3 μM) induziert auch eine nahezu maximale Hemmung der Akt1-Aktivität und -Phosphorylierung innerhalb von 5 min, und die Phosphorylierung von Akt-Substraten (FoxO, GSK3 und PRAS40) wird zu einem etwas späteren Zeitpunkt (10 min) gehemmt. Es (0,3 μM) hemmt signifikant die Phosphorylierung von Akt oder PRAS40/GSK3 in PDK1K^465E/K465E Knock-in, aber nicht in Wildtyp-ES-Zellen. Diese Verbindung (1 μM) unterdrückt effektiv die SGK1-Aktivität, wie durch die Hemmung der NDRG1-Phosphorylierung in U87-Glioblastomzellen beurteilt. Es (1 μM) unterdrückt auch potent die Aktivierung von S6K1 (Abbildung 7B) sowie SGK1 in MEF-Zellen (Mäuse-Embryo-Fibroblasten). Diese Chemikalie (0,1 μM) induziert ~50 % Hemmung der RSK2-Aktivität in HEK-293-Zellen. [1]

Es (30 μM) unterdrückt die U46619-induzierte Ca²⁺-sensibilisierte Kraft in α-Toxin-permeabilisierten Kaninchen-Pulmonalarterien-SM. Diese Verbindung (30 μM) führt zu einer signifikanten Abnahme der kontraktilen Kraft als Reaktion auf [Ca²⁺]. [2]

Es (1 μM) führt zu einer vollständigen Aufhebung des EGF-induzierten intrazellulären Kalziumanstiegs und der Akkumulation von Inositphosphaten in MDA-MB-231-Zellen. Diese Chemikalie (1 μM) hemmt die PLCγ1-Tyr783-Phosphorylierung in MDA-MB-231-Zellen. [3]

Diese Verbindung ist ein hochspezifischer und potenter Inhibitor von PDK1.

• Kinaseaktivitätstests

  Endogenes Akt, S6K und RSK werden aus 0,1 mg bis 1 mg Zelllysat für 2 Stunden bei 4 °C auf einer Vibrationsplattform unter Verwendung von 3 μg–5 μg der angegebenen Antikörper immunoprecipitiert. Für die SGK-Aktivitätstests werden 150 μg transfiziertes Lysat mit 5 μg Glutathion-Sepharose für 3 Stunden bei 4 °C inkubiert. Die Immunpräzipitate werden zweimal mit Lysepuffer, der 0,5 mM NaCl enthält, gewaschen, gefolgt von zwei Waschungen mit Kinasepuffer. Kinase-Reaktionen werden durch eine Reaktionsmischung initiiert, um die Endkonzentrationen der Reaktionskomponenten auf 0,1 mM [γ-³²P]ATP (~200 c.p.m./pmol), 5 mM Magnesiumacetat, 0,1 % 2-Mercaptoethanol und 30 mM Crosstide-Peptid (GRPRTSSFAEGKK) zu bringen. Die Reaktionen werden 20 min bei 30 °C auf einer Vibrationsplattform durchgeführt und durch Auftragen der Reaktionen auf P81-Phosphozellulosepapier gestoppt. Die Cerenkov-Zählung erfolgt nach dem Waschen der Papiere in Phosphorsäure, Spülen in Aceton und Lufttrocknen. Eine Einheit Aktivität ist definiert als diejenige, die die Inkorporation von 1 nmol [³²P]Phosphat in das Substrat über 1 Stunde katalysierte.

• Zelllinien

  MDA-MB-231 cells

• Konzentrationen

  1 µM

• Inkubationszeit

  30 minutes

• Methode

  Cells were incubated with 1 µM of GSK2334470 for 30 minutes. Cells treated with DMSO were used as control.

• Tiermodelle

  Nude mice

• Dosierungen

  100 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.