GSK3787

GSK3787 antagonisiert irreversibel menschliches und Maus-PPARδ, das kovalent Cys249 innerhalb der Ligandenbindungsstelle modifiziert. Diese Verbindung (1 μM) antagonisiert effektiv die durch den Agonisten GW0742 stimulierte Transkription von CPT1a und PDK4 in menschlichen Skelettmuskelzellen und antagonisiert effektiv die basale Genexpression von CPT1a. Sie zeigt keine wirksame antiproliferative Aktivität gegen Darmkrebszellen. [1]

Diese Chemikalie (1 μM) antagonisiert vollständig die durch 50 nM GW0742 induzierte PPARβ/δ-abhängige Angptl4-Genexpression in Wildtyp-Fibroblasten und in Keratinozyten. Sie (1 μM) antagonisiert weitgehend die durch 50 nM GW0742 induzierte Angptl4- und Adrp-mRNA-Expression in Hautkrebszelle A341. Diese Verbindung (1 μM) antagonisiert weitgehend die durch GW0742 induzierte Angptl4-mRNA-Expression in den Krebszelllinien MCF7 (Brust), Huh7 (Leber) und HepG2 (Leber), jedoch nicht in H1838- oder A549-Zellen (Lunge). Sie (1 μM) antagonisiert weitgehend den durch GW0742 induzierten Anstieg der Adrp-mRNA in Huh7- und HepG2-Zellen, jedoch nicht in H1838-Zellen. Diese Chemikalie antagonisiert die basale Expression keiner dieser beiden PPARβ/δ-Zielgene in diesen Zellen. Weder GW0742 noch diese Verbindung haben bei Konzentrationen von 0,1 bis 10 μM eine Wirkung auf die Zellproliferation dieser Zellen. Sie ist in der Lage, die Assoziation von sowohl PPARβ/δ- als auch PPARγ-Koregulatorpeptiden als Reaktion auf die Ligandenaktivierung zu modulieren. Die Wirksamkeit dieser Chemikalie zur Modulation der PPARγ-Aktivität ist deutlich geringer als ihre Wirksamkeit als PPARβ/δ-Antagonist. [2]

GSK3787 antagonisiert die Liganden-induzierte PPARβ/δ-abhängige Genexpression in vivo. Die orale Verabreichung dieser Verbindung hat keine Wirkung auf die Expression von Angptl4- und Adrp-mRNA im Mausepithel des Dickdarms. Die Koadministration dieser Chemikalie (10 mg/kg) verhindert effektiv die GW0742-induzierte Expression sowohl von Angptl4- als auch von Adrp-mRNA im Dickdarmepithel von Wildtyp-Mäusen, was mit einer reduzierten Promotorbesetzung von PPARβ/δ an den Angptl4- und Adrp-Genen korreliert ist. Die Verabreichung dieser Verbindung hatte keine Auswirkung auf die Glukosetoleranz. [2]

• Sättigungsbindungsassay

  Unter Verwendung von 96-Well-Kulturplatten werden 50 nM gereinigtes humanes PPARG-LBD und die gewünschte Konzentration von [³H]GW3738 auf ein Gesamtvolumen von 100 μL mit einem Puffer verdünnt, der 50 mM KCl, 5 mM EDTA, 10 mM Dithiothreitol (DTT), 50 mM HEPES bei pH 7 enthält. Sättigungsbindungsassays werden mit Konzentrationen dieser Verbindung im Bereich von 1 bis 250 nM durchgeführt. Die unspezifische Bindung bei jeder Konzentration von [³H]GW3738 wird in parallelen Inkubationen mit 50 μM unmarkiertem GW 3738 geschätzt. Die Platten werden 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Freier Ligand wird durch Größenausschlusschromatographie unter Verwendung handelsüblicher 96-Well-Format-Spinsäulen von Rezeptor-gebundenem Liganden getrennt. Proben (50 μL) aus jeder Vertiefung einer einzelnen Testplatte werden auf einen Puffer- und Temperatur-äquilibrierten 96-Well-Gelfiltrationsblock geladen. Der Block wird auf eine saubere Mikrotiterplatte gestellt und 4 Minuten bei 1100 g zentrifugiert. Szintillationsflüssigkeit (180 μL) wird zu jeder Vertiefung der Platte mit dem Eluenten gegeben, und die Platten werden versiegelt und mindestens 4 Stunden äquilibrieren gelassen, bevor sie in einem Zähler gezählt werden. Die Menge der unspezifischen Bindung bei jeder Konzentration von [³H]GW3738 wird von allen Vertiefungen subtrahiert, und es werden Diagramme der Konzentration dieser Chemikalie gegen gebundene Counts per Minute (cpm) erstellt. Die K_d-Werte für [³H]GW3738 werden aus einer nichtlinearen Kleinste-Quadrate-Anpassung der Daten an ein einfaches Bindungsmodell bestimmt.