GSK650394

Katalog-Nr.S7209 Charge:S720904

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Technische Daten

Formel

C25H22N2O2
Molekulargewicht 382.45 CAS-Nr. 890842-28-1
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 76 mg/mL (198.71 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung GSK650394 ist ein Serum- und Glukokortikoid-regulierter Kinase-1-Inhibitor mit einer IC50 von 62 nM bzw. 103 nM für SGK1 und SGK2.
Ziele
SGK1
(Cell-free assay)		 SGK2
(Cell-free assay)
62 nM 103 nM
In vitro GSK650394 hemmt den SGK1-vermittelten epithelialen Transport mit einer IC50 von 0,6 μM im SCC-Assay. In LNCaP-Zellen hemmt diese Verbindung die Androgen-vermittelte Verstärkung der Nedd4-2-Phosphorylierung und das Androgen-vermittelte Zellwachstum.Diese Chemikalie wirkt der Cortisol-induzierten Abnahme der Neurogenese, Veränderungen in der Hedgehog-Signalübertragung und der GR-Kern-Translokation entgegen. [2] Sie hemmt die Replikation des Influenza-Virus, indem sie den Export von Influenza-vRNPs in das Zytoplasma von A549-Zellen beeinträchtigt.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Szintillations-Proximity-Assay (SPA)

    SGK1 S422D (60–431 aa; 0,275 μg/ml Endkonzentration) oder SGK2 (0,875 μg/ml Endkonzentration) werden durch PDK1 (1,1 μg/ml Endkonzentration) in einem Puffer bestehend aus 50 mM Tris (pH 7,5), 0,1 mmol/l EGTA, 0,1 mmol/l EDTA, 10 mmol/l MgCl2, 0,1 % β-Mercaptoethanol, 1 mg/ml BSA und ATP (Endkonzentration von 0,15 mmol/l) und 30 Minuten lang bei 30 °C inkubiert. SGK2 wird genau wie für SGK1 beschrieben hergestellt, außer dass es dem Protein in voller Länge entspricht. Eine Lösung mit biotinyliertem Crosstide-Peptid in einer Endkonzentration von 75 μM und γ32P-ATP entsprechend 2×106 cpm wird im Reaktionspuffer hergestellt. In einer 96-Well-Platte werden 5 μl dieser Verbindung zu 25 μl der aktivierten Enzymmischung gegeben. Dazu werden 20 μl der Crosstide-Mischung hinzugefügt und 1 Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert. Als nächstes werden 50 μl einer 25 mg/ml-Suspension von Streptavidin-beschichteten SPA-Beads in PBS mit 0,1 M EDTA, pH 8,0, hinzugefügt. Die Platte wird anschließend verschlossen und 8 Minuten lang bei 2000 U/min zentrifugiert, anschließend wird das Signal durch eine 30-sekündige Messung pro Vertiefung in einem Packard TopCount NXT Szintillationszähler erfasst. Die IC50-Werte der Hemmung der SGK1- und SGK2-Aktivitäten durch diese Chemikalie werden aus diesen Daten mit der Software GraphPad Prism 3 berechnet.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    LNCaP cells

  • Konzentrationen

    ~10 μM

  • Inkubationszeit

    7 days

  • Methode

    LNCaP cells are plated at a density of 5,000 cells per well in 96-well plates in 100 μL PRF-RPMI 1640, supplemented with 8% CS-FBS, 0.1 mM NEAA, and 1 mM NaPyr. At day three, cells are treated with hormone with or without GSK650394 by removing 50 μL of the media and replacing this with 50 μL of PRF-RPMI 1640 with 8% CS-FBS, NEAA, NaPyr containing a 2X concentration of the appropriate hormone/this compound treatment. At days 5 and 7, the treatment is repeated. On the tenth day, the media is removed and the relative cell number is measured using the FluoReporter Blue assay according to the manufacturer’s instructions.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794135/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23650397/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23487453/

Kundenproduktvalidierung

BV-2 cells were incubated in the absence or presence of gsk650394 (1 μM) for 30 min, followed by LPS (500 ng/ml) administration for 30 min, and then fixed. NF-κB p65 protein was visualized by indirect immunofluorescence staining using an antibody for NF-κB p65. For nuclear staining, the cells were stained with DAPI. Bar = 20 μm.

Daten von [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 478(1):53-59 ]

GSK650394 treatment reduces steady state levels of BoHV-1 proteins. Cells were grown prior to infection. Three hours prior to infection 25 nM of GSK650394 was added to the designated cultures. CRIB cells were infected withBoHV-1 (moi=2) and then stripped FBS added. At the designated times after infection (hours), whole cell lysate (50 ug protein) was prepared and Western Blots performedusing the designated antibodies directed against a viral protein. Arrows denote the position of bICP0 (97 kD), bICP4 (178 kD), bICP22 (45 kD), VP16 (65 kD), and the bracketdenotes various gE forms. Tubulin was used as a loading control. The lane marked M are molecular weight markers: numbers to left are the approximate size of the respectivebands. These results are representative of 4 independent experiments. The relative levels of the respective BoHV-1 proteins were estimated by comparing the intensity ofthe bands to tubulin using a BioRad ChemiDoc MP and PMI System. The value of the respective viral protein that was first detected after infection was set at 10 and the othervalues normalized to this value. ND refers to those lanes in which the viral protein was not detected. These results are representative of three independent experiments.

Daten von [ , , Virus Res, 2016, 222:106-112. ]

Sellecks GSK650394 Wurde zitiert von 24 Publikationen

Patient-derived enteroids provide a platform for the development of therapeutic approaches in microvillus inclusion disease [ J Clin Invest, 2023, 133(20)e169234] PubMed: 37643022
Bacterial DNA promoting inflammation via the Sgk1/Nedd4L/Syk pathway in mast cells contributes to antihistamine non-responsive CSU [ J Leukoc Biol, 2023, qiad025] PubMed: 36857592
Estrogen-sensitive activation of SGK1 induces M2 macrophages with anti-inflammatory properties and a Th2 response at the maternal-fetal interface [ Reprod Biol Endocrinol, 2023, 21(1):50] PubMed: 37226177
Inhibition of SGK1 potentiates the anticancer activity of PI3K inhibitor in NSCLC cells through modulation of mTORC1, p‑ERK and β‑catenin signaling [ Biomed Rep, 2023, 19(6):94] PubMed: 37901878
Therapy Development for Microvillus Inclusion Disease using Patient-derived Enteroids [ bioRxiv, 2023, 2023.01.28.526036] PubMed: 36747680
Activation of Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 1/Nuclear Factor-κB Pathway Are Correlated with Low Sensitivity to Bortezomib and Ixazomib in Resistant Multiple Myeloma Cells [ Biomedicines, 2021, 9(1)E33] PubMed: 33406639
Identification and Kinetic Characterization of Serum- and Glucocorticoid-Regulated Kinase Inhibitors Using a Fluorescence Polarization-Based Assay [ SLAS Discov, 2021, 24725552211002465] PubMed: 33783250
Crosstalk between Hedgehog pathway and the glucocorticoid receptor pathway as a basis for combination therapy in T-cell acute lymphoblastic leukemia [ Oncogene, 2020, 10.1038/s41388-020-01453-2] PubMed: 32917954
Convergent genomic and pharmacological evidence of PI3K/GSK3 signaling alterations in neurons from schizophrenia patients [ Neuropsychopharmacology, 2020, 10.1038/s41386-020-00924-0] PubMed: 33288841
Targeting histone K4 trimethylation for treatment of cognitive and synaptic deficits in mouse models of Alzheimer's disease [ Sci Adv, 2020, 6(50)eabc8096] PubMed: 33298440

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