GW5074

GW5074 ist ein potenter und spezifischer Inhibitor von c-Raf mit einer IC50 von 9 nM und hat in vitro keine Wirkung auf MKK6, MKK7, p38 MAP Kinase und cdks. Die Behandlung neuronaler Kulturen mit dieser Verbindung ermöglicht jedoch die Akkumulation aktivierender Modifikationen an c-Raf und auch B-Raf. Die Hemmung der LK-induzierten Apoptose durch diesen Inhibitor in zerebellären Körnerneuronen ist nicht MEK-ERK-abhängig. Diese Chemikalie verzögert die Herunterregulierung der Akt-Aktivität, hemmt aber die Apoptose durch einen Akt-unabhängigen Mechanismus. Sie beeinflusst Ras, den nukleären Faktor-kappa B und c-jun. Diese Verbindung hemmt den Zelltod, der durch Neurotoxine in Körnerzellen und anderen neuronalen Typen verursacht wird. [1]

GW5074 wirkt schützend in einem in vivo experimentellen Modell der Huntington-Krankheit. Diese Verbindung (5 mg/Kg) verhinderte vollständig umfangreiche bilaterale striatale Läsionen, die durch 3-NP bei Mäusen induziert wurden. [1]  Es unterdrückt die durch Nebenstromrauch induzierte Atemwegsüberempfindlichkeit bei Mäusen. [3]

• Affinitätsbestimmung

  Im Allgemeinen werden In-vitro-Kinase-Assays mit gereinigter Kinase und synthetischen Substraten unter Standardbedingungen unter Verwendung des Kinase-Profiling-Dienstes von Upstate Biotechnology durchgeführt. Kurz gesagt, für jeden Assay werden 5–10 mU gereinigter Kinase verwendet. Für GSK3β, cdk1, cdk2, cdk3, cdk5 wird die Kinase mit 1 μM GW5074 in einem Puffer inkubiert, der 8 mM MOPS, pH 7,2, 0,2 mM EDTA, 10 mM Magnesiumacetat und [c- ³³P-ATP] für 40 min bei Raumtemperatur enthält. Die Kinaseaktivität wird durch Messung des ³³P-Einbaus quantifiziert, indem ein Aliquot auf P30-Filtern aufgetragen, in 50 mM Phosphorsäure gewaschen und die Szintillationszählung durchgeführt wird. Die Pufferzusammensetzung für c-Raf, JNK1, JNK2, JNK3, MEK1, MKK6, MKK7 beträgt 50 mM Tris pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 10 mM Magnesiumacetat und [c- ³³P-ATP]. Die verwendeten Peptidsubstrate sind wie folgt: Für c-Raf, 0,66 mg/mL MBP; für cdks, 0,1 mg/mL Histon H1; für JNKs, 3 μM ATF2; für MEK1, 1 μM MAPK2; für MKK6, 1 μM SAPK2a und für MKK7, 2 μM JNK1α.

• Zelllinien

  Cortical neurons

• Konzentrationen

  ~5 μM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  HCA is diluted from 100-fold concentrated solutions that are adjusted to pH 7.5. To evaluate the effects of GW5074 on HCA-induced cytotoxicity, this compound is added at the time cortical neurons are exposed to HCA. Viability is assessed 24 h later.

• Tiermodelle

  Eight-week-old C57BL/6 male mice administered with 50–55 mg/kg 3-NP

• Dosierungen

  0.5–10 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.