GW9662

GW9662 bindet an Cys(285) auf PPARgamma, das unter allen drei PPARs konserviert ist. Diese Verbindung wirkt als Antagonist von PPARgamma, was in einem Assay zur Hemmung der Adipozytendifferenzierung bestätigt wird. [1] Es verhindert die Aktivierung von PPARγ und hemmt das Wachstum von menschlichen Mammakarzinomzelllinien (MCF7, MDA-MB-468, MDA-MB-231) mit einer IC50 von 20 μM-30 μM, was entweder die Existenz von PPARγ-agonistischen Eigenschaften dieser Chemikalie oder wachstumshemmende Mechanismen, die unabhängig von PPARγ sind, nahelegt. Eine Co-Behandlung mit dieser Verbindung (10 μM) führt nach 7 Tagen in MDA-MB-231-Zellen zu statistisch geringeren Zellzahlen. [2] PPARγ1-Liganden könnten die RANKL-induzierte Osteoklastenbildung in primären murinen myeloischen (BMs) und RAW264.7-Zellen unterdrücken. Wichtig ist, dass die Unterdrückung durch diese Liganden dosisabhängig mit dieser Chemikalie (2 μM) aufgehoben wird. Es (2 μM) blockiert die IL-4-Unterdrückung der Osteoklastenbildung in BMs. Diese Verbindung (1 μM) blockiert die RANKL-Aktivierung von NF-κB in RAW264.7-Zellen. [3] GW9662 (10 μM) hemmt die Hormon- und Agonist-induzierte Adipogenese von primären Präadipozyten von Patienten mit Schilddrüsenaugenerkrankung. [4]

Eine Vorbehandlung mit LPS (1 mg/kg i.p.) attenuierte signifikant alle Marker für Nierenverletzung und -dysfunktion, die durch Ischämie/Reperfusion (I/R)-Verletzung bei Ratten verursacht wurden. Insbesondere hob diese Verbindung (1 mg/kg i.p.) die schützenden Effekte von LPS auf. [5]

• Bindungsassay

  Die humanen PPARα-, PPARγ- und PPARδ-Ligandenbindungsdomänen (LBDs) werden in E. coli als polyhistidin-markierte Fusionsproteine exprimiert. Rezeptoren werden durch Zugabe des gewünschten Rezeptors (15 nM) zu einer Suspension von Streptavidin-modifizierten SPA-Beads (0,5 mg/mL) in Assay-Puffer auf SPA-Beads immobilisiert. Die Mischung wird mindestens 1 Stunde bei Raumtemperatur äquilibrieren gelassen, und die Beads werden durch Zentrifugation bei 1×10³ g pelletiert. Der Überstand wird verworfen, und die Beads werden im ursprünglichen Volumen frischen Assay-Puffers unter sanftem Mischen resuspendiert. Das Zentrifugations-/Resuspensionsverfahren wird wiederholt, und die resultierende Suspension von Rezeptor-beschichteten Beads wird sofort verwendet oder bei 4 ℃ für bis zu 1 Woche vor Gebrauch gelagert. [3H]GW2443 werden als Radioliganden zur Bestimmung der Kompetitionbindung an PPARα, PPARγ bzw. PPARδ verwendet. Sofern nicht anders angegeben, ist der für alle Assays verwendete Puffer 50 mM HEPES (pH 7), 50 mM NaCl, 5 mM CHAPS, 0,1 mg/mL BSA und 10 mM DTT. Für einige Experimente wird das HEPES (pH 7) durch 50 mM Tris (pH 8) ersetzt.

• Zelllinien

  MDA-MB-231 cells

• Konzentrationen

  10 μM

• Inkubationszeit

  10 days

• Methode

  MDA-MB-231 cells are seeded at a density of 1 × 10⁵ cells per 25 cm³ tissue culture flask. After 24 h (day 0), the growth medium is replaced with fresh medium containing GW9662 (10 μM) or both together. Control flasks receives 0.1% DMSO. Cells are harvested on days 0, 3, 5, 7, 10 for each treatment condition by trypsinisation, stained using trypan blue, and the total and viable number of cells per flask calculates using a haemocytometer.

• Tiermodelle

  male Wistar rats

• Dosierungen

  1 mg/kg

• Verabreichung

  intraperitoneal injection