H2DCFDA (DCFH-DA)

Katalog-Nr.S9687 Charge:S968701

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Technische Daten

Formel

C24H16Cl2O7
Molekulargewicht 487.29 CAS-Nr. 4091-99-0
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (199.06 mM)
Ethanol 7 mg/mL (14.36 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung H2DCFDA (DCFH-DA) ist eine zellgängige Sonde, die zur Detektion der intrazellulären reaktiven Sauerstoffspezies (ROS)-Produktion verwendet wird. Sie wird intrazellulär de-esterifiziert und wandelt sich bei Oxidation in hochfluoreszierendes 2′,7′-Dichlorfluorescein um. Diese Verbindung wird zur empfindlichen und schnellen Quantifizierung von sauerstoffreaktiven Spezies als Reaktion auf oxidativen Metabolismus, für Microplatten-Assays zum Nachweis oxidativer Produkte in phagozytischen Zellen und für quantitative Multiwell-Assays zur myeloischen Differenzierung eingesetzt (Ex/Em=488/525 nm).
Ziele
ROS
In vitro

1. H2DCFDA (DCFH-DA) wird in DMSO gelöst, um 10 mM Stammlösungen zu erhalten und vor Gebrauch weiter verdünnt.
2. Zellen werden 30 Minuten lang bei 37 °C im Dunkeln mit 5 μM dieser Verbindung in PBS inkubiert, dann mit 0,05%iger Trypsin-EDTA-Lösung geerntet, in einem frischen Medium suspendiert und sofort mit einem Durchflusszytometer analysiert.
3. Falls angegeben, verwenden Sie ROS-unempfindliche Modifikationen des Fluorescein-Farbstoffs DCFDA als positive Kontrolle. Das Färbeverfahren ist dasselbe wie für die H2DCFDA.
Emission (Em)=517 Anregung (Ex)=492 517

Protokoll (aus Referenz)

Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    hCECs

  • Konzentrationen

    10 μM

  • Inkubationszeit

    30 min

  • Methode

    Intracellular ROS levels in hCECs are measured by incubating the cells with the redox-sensitive fluorescent dye H2DCFDA (DCFH-DA) (10 μM) at 37℃ for 30 minutes in the dark. The cells are then detached from the culture wells using 0.25% trypsin-EDTA and washed twice using ice-cold PBS. Flow cytometry measurements are performed three times for each treatment. Mean fluorescence intensity is quantified using software. Cells that had been incubated without this compound are used as negative control. The distribution of fluorescent dichlorofluorescein (DCF) on the cell monolayer is visualized and photographed using a fluorescence microscope.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26976009/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30372737/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26976009/

Sellecks H2DCFDA (DCFH-DA) Wurde zitiert von 9 Publikationen

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Elevated neutrophil extracellular traps by HBV-mediated S100A9-TLR4/RAGE-ROS cascade facilitate the growth and metastasis of hepatocellular carcinoma [ Cancer Commun (Lond), 2022, 10.1002/cac2.12388] PubMed: 36346061
S100A8-Mediated NLRP3 Inflammasome-Dependent Pyroptosis in Macrophages Facilitates Liver Fibrosis Progression [ Cells, 2022, 11(22)3579] PubMed: 36429008
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