HS-1371

Katalog-Nr.S8775 Charge:S877501

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Technische Daten

Formel

C₂₄H₂₄N₄O

Molekulargewicht

384.47

CAS-Nr.

2158197-70-5

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

13 mg/mL (33.81 mM)

Ethanol

4 mg/mL (10.4 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.650mg/ml (1.69mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.650mg/ml (1.69mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 13 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

HS-1371 ist ein potenter RIP3-Kinase-Inhibitor mit einer IC50 von 20,8 nM. Er bindet an die ATP-Bindungstasche von RIP3 und hemmt die ATP-Bindung, um die enzymatische Aktivität von RIP3 in vitro zu verhindern.

Ziele

RIP3 kinase

20.8 nM

In vitro

HS-1371 zeigt eine hemmende Wirkung auf die S227-Autophosphorylierung von RIP3 auf Basisebene. Es zeigt eine vollständige hemmende Wirkung auf die TNF-induzierte Nekroptose-Signalgebung, wobei keine Phosphorylierung von RIP3 und MLKL in HT-29-Zellen nachweisbar ist. Die Hemmung der RIP3-Kinaseaktivität durch diese Verbindung blockiert die Bildung des Nekrosom-Komplexes, was eine Störung der MLKL-Rekrutierung zeigt. Diese Chemikalie rettet Zellen vor TNF-induzierter Nekroptose. Sie rettet Zellen vor RIP3-abhängigem nekroptotischem Zelltod, aber nicht vor apoptotischem Zelltod.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	Enzymatische Assays Die hemmenden Aktivitäten aller Verbindungen gegenüber RIP3 wurden von Reaction Biology Corp. mittels radiometrischer Kinase-Assays ([γ-32P]ATP) gemessen. Die enzymatische Aktivität von RIP3 wurde unter Verwendung von 20 μM Myelin-Basischem Protein (MBP), gelöst in frisch zubereitetem Reaktionspuffer (20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,02 % BRIJ-35, 0,02 mg/mL BSA, 0,1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1 % DMSO), überwacht. Jeder mutmaßliche RIP3-Inhibitor wurde in 100 % DMSO in spezifischen Konzentrationen gelöst und seriell mit epMotion 5070 in DMSO verdünnt. Menschliches RIP3 und 20 μM Peptidsubstrat (MBP) wurden zum Reaktionspuffer gegeben. Nach Zugabe des in DMSO gelösten Kandidaten-Inhibitors zur Kinase-Reaktionsmischung mittels Akustik-Technologie (Echo550; Nanoliter-Bereich) wurde die Reaktionsmischung 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Um die enzymatische Reaktion zu initiieren, wurde 33P-ATP mit einer spezifischen Aktivität von 10 μCi/μL zur Reaktionsmischung gegeben, um eine finale ATP-Konzentration von 10 μM zu erreichen. Die Radioaktivität wurde dann mittels Filterbindungsmethode nach Inkubation der Reaktionsmischung für 2 Stunden bei Raumtemperatur überwacht. Bei gegebenen Inhibitor-Konzentrationen wurde die biochemische Potenz durch den prozentualen Anteil der verbleibenden Kinase-Aktivität im Vergleich zur Vehikel-Reaktion (Dimethylsulfoxid) gemessen. Kurvenanpassungen und IC50-Werte wurden dann mit dem PRISM-Programm erhalten. Der ATP-kompetitive Inhibitor Staurosporin (STSP) wurde in dieser Studie als positive Kontrolle verwendet, aufgrund seiner hohen biochemischen Potenz gegen verschiedene Kinasen, einschließlich RIP3.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien HT-29 cells Konzentrationen 5 μM Inkubationszeit 2 h Methode HT-29 cells were pretreated with Nec-1 (40 μM), DAB (5 μM) or HS-1371 (5 μM) for 2 h and then treated with TSZ for 4 h. Cell lysates were immunoprecipitated with anti-RIP3 antibody.

Kinase-Assay:^{^[1]}

Enzymatische Assays
Die hemmenden Aktivitäten aller Verbindungen gegenüber RIP3 wurden von Reaction Biology Corp. mittels radiometrischer Kinase-Assays ([γ-32P]ATP) gemessen. Die enzymatische Aktivität von RIP3 wurde unter Verwendung von 20 μM Myelin-Basischem Protein (MBP), gelöst in frisch zubereitetem Reaktionspuffer (20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,02 % BRIJ-35, 0,02 mg/mL BSA, 0,1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1 % DMSO), überwacht. Jeder mutmaßliche RIP3-Inhibitor wurde in 100 % DMSO in spezifischen Konzentrationen gelöst und seriell mit epMotion 5070 in DMSO verdünnt. Menschliches RIP3 und 20 μM Peptidsubstrat (MBP) wurden zum Reaktionspuffer gegeben. Nach Zugabe des in DMSO gelösten Kandidaten-Inhibitors zur Kinase-Reaktionsmischung mittels Akustik-Technologie (Echo550; Nanoliter-Bereich) wurde die Reaktionsmischung 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Um die enzymatische Reaktion zu initiieren, wurde 33P-ATP mit einer spezifischen Aktivität von 10 μCi/μL zur Reaktionsmischung gegeben, um eine finale ATP-Konzentration von 10 μM zu erreichen. Die Radioaktivität wurde dann mittels Filterbindungsmethode nach Inkubation der Reaktionsmischung für 2 Stunden bei Raumtemperatur überwacht. Bei gegebenen Inhibitor-Konzentrationen wurde die biochemische Potenz durch den prozentualen Anteil der verbleibenden Kinase-Aktivität im Vergleich zur Vehikel-Reaktion (Dimethylsulfoxid) gemessen. Kurvenanpassungen und IC50-Werte wurden dann mit dem PRISM-Programm erhalten. Der ATP-kompetitive Inhibitor Staurosporin (STSP) wurde in dieser Studie als positive Kontrolle verwendet, aufgrund seiner hohen biochemischen Potenz gegen verschiedene Kinasen, einschließlich RIP3.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
HT-29 cells
Konzentrationen
5 μM
Inkubationszeit
2 h
Methode
HT-29 cells were pretreated with Nec-1 (40 μM), DAB (5 μM) or HS-1371 (5 μM) for 2 h and then treated with TSZ for 4 h. Cell lysates were immunoprecipitated with anti-RIP3 antibody.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30237400/

Sellecks HS-1371 Wurde zitiert von 3 Publikationen

MRE11 liberates cGAS from nucleosome sequestration during tumorigenesis [ Nature, 2024, 625(7995):585-592]	PubMed: 38200309
Necroptotic virotherapy of oncolytic alphavirus M1 cooperated with Doxorubicin displays promising therapeutic efficacy in TNBC [ Oncogene, 2021, 10.1038/s41388-021-01869-4]	PubMed: 34155344
Inhibition of Cardiac RIP3 Mitigates Early Reperfusion Injury and Calcium-Induced Mitochondrial Swelling without Altering Necroptotic Signalling [ Int J Mol Sci, 2021, 22(15)7983]	PubMed: 34360749

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