HS-173

HS-173 zeigt potente antiproliferative Effekte in T47D-, SK-BR3- und MCF7-Zellen mit einer IC50 von 0,6, 1,5 bzw. 7,8 μM. [1] Diese Verbindung bewirkt eine vollständige Unterdrückung des PI3K-Signalwegs in Krebszelllinien (Hep3B und SkBr3). Darüber hinaus induziert sie die Zellapoptose, indem sie die Zellzyklusverteilung beeinflusst und Caspasen aktiviert, und blockiert die VEGF-induzierte Angiogenese in vitro. [2]

HS-173 verringert die Blutgefäßbildung bei Mäusen. [2] Diese Verbindung schwächt die Entwicklung der Leberfibrose erheblich ab, indem sie die PI3K/Akt-Signalübertragung in vivo blockiert. [4]

• PI3-Kinase-Assay

  Der PI3K-Assay wird mit dem Kinase-Glo Max Lumineszenz-Kinase-Assay-Kit durchgeführt, das die Menge an ADP quantifiziert, die durch die PI3K-Reaktion produziert wird. Kurz gesagt, eine aktive PI3K (100 ng) wird 5 Minuten lang mit dieser Verbindung in Kinase-Reaktionspuffer (25 mM MOPS [pH 7,0], 5 mM MgCl₂ und 1 mM EGTA) und 10 μg l-α-Phosphatidylinositol (PI) vorinkubiert. Vor der Zugabe von PI wird es 20 Minuten lang mit Sonikationspuffer (25 mM MOPS [pH 7,0], 1 mM EGTA) in Wasser beschallt, um die Mizellenbildung zu ermöglichen. Dann wird die Reaktion durch Zugabe von 10 μM ATP gestartet und 180 Minuten lang durchgeführt. Um die Kinase-Reaktion zu beenden, wird das gleiche Volumen Kinase-Glo Max Puffer hinzugefügt. Nach 10 Minuten werden die Platten dann auf einem GloMax Plattenlesegerät zur Lumineszenzdetektion abgelesen.

• Zelllinien

  T47D, SK-BR3, MCF7 cells

• Konzentrationen

  ~50 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Cell viability is performed by a MTT assay. Briefly, T47D cells are plated in 96-well plates for 24 h. Then, the medium is removed and cells were treated with either DMSO as a control or various concentrations of inhibitors. The final concentration of DMSO in the medium was ≤0.1% (v/v). After the cells are incubated for 48 h, 20 μL MTT solution (5 mg/mL) is added to each well for another 4 h at 37 °C. The formazan crystals that formed are dissolved in DMSO (100 μL/well) by constant shaking for 5 min. The plate is then read on a microplate reader at 540 nm. Three replicate wells are used for each analysis. The median inhibitory concentration (IC50, defined as the drug concentration at which cell growth is inhibited by 50%) is assessed from the dose−response curves. To assess the effect of compounds on cell proliferation, T47D cells are cultured with this compound (0.1−100 μM) for 48 h before MTT analysis.

• Tiermodelle

  Male BALB/c mice with CCl4-induced liver fibrosis

• Dosierungen

  ~20 mg/kg

• Verabreichung

  p.o.