Datenblatt

Biologische Beschreibung

Spezifität	Human Dectin-1/CLEC7A Antibody [J4K7] detektiert endogene Spiegel des gesamten Dectin-1/CLEC7A-Proteins.
Hintergrund	Human Dectin-1 (CLEC7A) ist ein Typ-II-Transmembran-C-Typ-Lektinrezeptor (CLR), der vorwiegend auf myeloischen Zellen, einschließlich Monozyten, Makrophagen, dendritischen Zellen und Neutrophilen, exprimiert wird und als der wichtigste Mustererkennungsrezeptor für Pilz-β-Glucane in der angeborenen Immunität dient. Er umfasst eine einzelne extrazelluläre Kohlenhydrat-Erkennungsdomäne (CRD), der in der kurzen Isoform ein Stiel fehlt, mit einer flachen, lösungsmittelzugänglichen Bindungsfurche, die durch die Reste W221, N242 und E248 gebildet wird und β-1,3/β-1,6-Glucanpolymere aus Hefe- und Mykobakterienzellwänden durch Ca²⁺-unabhängige, lektinähnliche Wechselwirkungen aufnimmt, die durch hydrophobe Stapelung und Wasserstoffbrückenbindungen unterstützt werden. Der Rezeptor enthält eine einzelne Transmembranhelix und einen kurzen zytoplasmatischen Schwanz, der ein unkonventionelles hemITAM-Motiv (E²YSEI) anstelle klassischer ITAM- oder ITIM-Motive trägt. Bei Ligandenbindung gruppiert sich Dectin-1 innerhalb cholesterolreicher Membrannanodomänen, was die Rekrutierung von Src-Familienkinasen (SFKs) ermöglicht, um das hemITAM-Tyrosin zu phosphorylieren, welches wiederum die Syk-Kinase über ihre dualen SH2-Domänen rekrutiert. Dies führt zum Andocken des CARD9/Bcl10/MALT1-Komplexes und der anschließenden Aktivierung von NF-κB p65, was die Produktion proinflammatorischer Zytokine wie IL-12, IL-23, IL-6 und TNF-α antreibt. Die Co-Lokalisation mit TLR2 verstärkt synergistisch die MAPK-Signalgebung (p38, ERK, JNK) und die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) über NOX2. Die längere Dectin-1-Isoform, die eine Stielregion umfasst, ermöglicht die Zymosan-Phagozytose, indem sie die Multivalenz der CRD und die effektive Pilzaufnahme erleichtert. Diese Syk–CARD9–NF-κB-Signalachse orchestriert die Th17-vermittelte Immunität gegen Krankheitserreger wie Candida und Aspergillus, während die O-Glykosylierung (T105 sialyl-core1) der Stielregion paradoxerweise als Gegenligand für das Thrombozyten-CLEC-2 fungiert und dadurch die Thrombose während einer Infektion unterdrückt.

Spezifität

Human Dectin-1/CLEC7A Antibody [J4K7] detektiert endogene Spiegel des gesamten Dectin-1/CLEC7A-Proteins.

Hintergrund

Human Dectin-1 (CLEC7A) ist ein Typ-II-Transmembran-C-Typ-Lektinrezeptor (CLR), der vorwiegend auf myeloischen Zellen, einschließlich Monozyten, Makrophagen, dendritischen Zellen und Neutrophilen, exprimiert wird und als der wichtigste Mustererkennungsrezeptor für Pilz-β-Glucane in der angeborenen Immunität dient. Er umfasst eine einzelne extrazelluläre Kohlenhydrat-Erkennungsdomäne (CRD), der in der kurzen Isoform ein Stiel fehlt, mit einer flachen, lösungsmittelzugänglichen Bindungsfurche, die durch die Reste W221, N242 und E248 gebildet wird und β-1,3/β-1,6-Glucanpolymere aus Hefe- und Mykobakterienzellwänden durch Ca²⁺-unabhängige, lektinähnliche Wechselwirkungen aufnimmt, die durch hydrophobe Stapelung und Wasserstoffbrückenbindungen unterstützt werden. Der Rezeptor enthält eine einzelne Transmembranhelix und einen kurzen zytoplasmatischen Schwanz, der ein unkonventionelles hemITAM-Motiv (E²YSEI) anstelle klassischer ITAM- oder ITIM-Motive trägt. Bei Ligandenbindung gruppiert sich Dectin-1 innerhalb cholesterolreicher Membrannanodomänen, was die Rekrutierung von Src-Familienkinasen (SFKs) ermöglicht, um das hemITAM-Tyrosin zu phosphorylieren, welches wiederum die Syk-Kinase über ihre dualen SH2-Domänen rekrutiert. Dies führt zum Andocken des CARD9/Bcl10/MALT1-Komplexes und der anschließenden Aktivierung von NF-κB p65, was die Produktion proinflammatorischer Zytokine wie IL-12, IL-23, IL-6 und TNF-α antreibt. Die Co-Lokalisation mit TLR2 verstärkt synergistisch die MAPK-Signalgebung (p38, ERK, JNK) und die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) über NOX2. Die längere Dectin-1-Isoform, die eine Stielregion umfasst, ermöglicht die Zymosan-Phagozytose, indem sie die Multivalenz der CRD und die effektive Pilzaufnahme erleichtert. Diese Syk–CARD9–NF-κB-Signalachse orchestriert die Th17-vermittelte Immunität gegen Krankheitserreger wie Candida und Aspergillus, während die O-Glykosylierung (T105 sialyl-core1) der Stielregion paradoxerweise als Gegenligand für das Thrombozyten-CLEC-2 fungiert und dadurch die Thrombose während einer Infektion unterdrückt.

Nutzungsinformationen

Anwendung

IF, FCM

Verdünnung

IF	FCM
1:40-1:125	1:400

Reaktivität

Human

Quelle

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Lagerpuffer

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Lagerung
(Ab dem Datum des Erhalts)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Experimentelle Methoden
IF	Experimental Protocol: Sample Preparation 1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use. 2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine. 3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time. 4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval. Fixation 1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes. 2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Permeabilization 1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes. (Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.) Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Blocking Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.) Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background. Immunofluorescence Staining (Day 1) 1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody. 2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight. Immunofluorescence Staining (Day 2) 1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours. 3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes. 5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. Mounting 1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium. 2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark. 3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

Experimentelle Methoden

IF

Experimental Protocol:

Sample Preparation

1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.

2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.

3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.

4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.

Fixation

1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.

2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Permeabilization

1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.

(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)

Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Blocking

Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)

Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.

Immunofluorescence Staining (Day 1)

1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.

2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.

Immunofluorescence Staining (Day 2)

1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.

3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.

5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

Mounting

1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.

2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.

3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35237264/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33588306/

Human Dectin-1/CLEC7A Antibody [J4K7]

Biologische Beschreibung

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