ICG-001

ICG-001 hat keine Wirkung auf das zugehörige Reporterkonstrukt FOPFLASH, das mutierte TCF-Stellen enthält. Nach Behandlung mit 25 μM dieser Verbindung für 8 Stunden reduzieren SW480-Zellen die Steady-State-Spiegel von Survivin- und Cyclin D1-RNA und -Protein, die beide durch β-catenin hochreguliert werden können. Diese Verbindung induziert selektiv Apoptose in transformierten Zellen, aber nicht in normalen Darmzellen, und reduziert das In-vitro-Wachstum von Kolonkarzinomzellen. [1] Es kann die normale Nervenwachstumsfaktor (NGF)-induzierte neuronale Differenzierung und Neuritenwachstum in Presenilin-1-Mutantenzellen phänotypisch retten, was die Bedeutung des TCF/β-catenin-Signalwegs für Neuritenwachstum und neuronale Differenzierung hervorhebt. [2] Eine aktuelle Studie zeigt, dass 5 μM dieser Chemikalie die Leptin-induzierte EMT, Invasion und Tumorsphärenbildung in MCF7-Zellen hemmt. [3]

Die Verabreichung eines wasserlöslichen Analogons von ICG-001 über 9 Wochen reduziert die Bildung von Polypen im Dick- und Dünndarm um 42 %, ebenso effektiv wie das nichtsteroidale entzündungshemmende Mittel, das in diesem Modell stets Wirksamkeit gezeigt hat. Während des gesamten Behandlungsverlaufs wird keine offensichtliche Toxizität festgestellt. Im SW620 Nacktmaus-Xenograft-Modell der Tumorrückbildung zeigt 150 mg/kg i.v. dieser Verbindung eine dramatische Reduktion des Tumorvolumens über den 19-tägigen Behandlungsverlauf, ohne Mortalität oder Gewichtsverlust. [1] Diese Chemikalie (5 mg/kg pro Tag) hemmt signifikant die Beta-Catenin-Signalübertragung und mildert Bleomycin-induzierte Lungenfibrose bei Mäusen, während gleichzeitig das Epithel erhalten bleibt. [4]

• DUAL-Luciferase Reporter Assay

  Das Dual-Luciferase Reporter (DLR) Assay System bietet eine effiziente Möglichkeit zur Durchführung von Dual-Reporter-Assays. Im DLR^TM Assay werden die Aktivitäten von Firefly (Photinus pyralis) und Renilla (Renilla reniformis, auch bekannt als Sea Pansy) Luciferasen nacheinander aus einer einzigen Probe gemessen. Der Firefly-Luciferase-Reporter wird zuerst gemessen, indem Luciferase Assay Reagent II (LAR II) hinzugefügt wird, um ein lumineszierendes Signal vom "Glow-Typ" zu erzeugen. Nach der Quantifizierung der Firefly-Lumineszenz wird diese Reaktion gelöscht, und die Renilla-Luciferase-Reaktion wird durch gleichzeitiges Hinzufügen von Stop & Glo® Reagent zum selben Röhrchen eingeleitet. Das Stop & Glo® Reagent erzeugt ebenfalls ein Signal vom "Glow-Typ" aus der Renilla-Luciferase, das im Verlauf der Messung langsam abnimmt. Im DLR^TM Assay System liefern beide Reporter lineare Assays mit Subattomol (<10-18) Empfindlichkeiten und keiner endogenen Aktivität eines der Reporter in den experimentellen Wirtszellen. Darüber hinaus bietet das integrierte Format des DLR^TM Assays eine schnelle Quantifizierung beider Reporter entweder in transfizierten Zellen oder in zellfreien Transkriptions-/Translationsreaktionen.

• Zelllinien

  Human colon carcinoma cell lines SW480, SW620, and HCT116, normal colonic epithelial cell line CCD-841Co

• Konzentrationen

  ~25 μM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  1. Prior to starting the assay, prepare the Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent, and mix thoroughly. 2. For best results, empirical determination of the optimal cell number, apoptosis induction treatment and incubation period for the cell culture system may be necessary. 3. Use identical cell numbers and volumes for the assay and the negative control samples. 4. Do not mix Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent and samples by manual pipetting. Mixing in this manner is unnecessary and may create bubbles that interfere with fluorescence readings or cross-contaminate the samples. Gentle mixing may be performed using a plate shaker. 5. Total incubation time for the assay depends upon the amount of caspase- 3/7 present in the sample. 6. The Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent is formulated to mediate cellular lysis and support optimal caspase-3/7 activity. In rare instances, the reagent does not affect complete lysis of cultured cells. In such cases, lysis is enhanced by a freeze-thaw cycle. For best results, freeze at -70 °C, then thaw at room temperature. After equilibration, mix to homogeneity and incubate until measurable fluorescence is achieved

• Tiermodelle

  C57BL/6 and nude mice tumor models

• Dosierungen

  20 mg/ kg

• Verabreichung

  i.p.