Capmatinib (INC280)

INCB28060 zeigt pikomolare enzymatische Potenz und ist hochspezifisch für c-MET mit mehr als 10.000-facher Selektivität gegenüber einem großen Panel menschlicher Kinasen. Diese Verbindung hemmt die Phosphorylierung von humanem c-MET und die c-MET-vermittelte Signalübertragung in Krebszellen. Es hemmt die c-MET-abhängige Zellproliferation und das Überleben und verhindert das Anker-unabhängige Wachstum von Krebszellen und die Zellmigration. [1]

INCB28060 zeigt eine starke Antitumoraktivität in c-MET-abhängigen Maustumormodellen, selbst eine orale Behandlung mit 0,03 mg/kg dieser Verbindung führt zu einer etwa 50%igen Hemmung der c-MET-Phosphorylierung. Eine dosisabhängige Hemmung des Tumorwachstums wird bei tumortragenden Mäusen beobachtet. [1]

• c-Met Kinase Assay

  Der Assay-Puffer enthält 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0,1 mg/ml BSA, 5 mM DTT, pH 7,8. Für HTS werden 0,8 μL von 5 mM dieser in DMSO gelösten Verbindung auf 384-Well-Platten getropft. Die DMSO-Titration deutet darauf hin, dass die maximal tolerierte Konzentration des Lösungsmittels 4 % beträgt. Zur Messung der IC50-Werte wird die INCB28060-Platte durch 3-fache und 11-Punkt-Serienverdünnungen hergestellt. 0,8 μL dieser Chemikalie in DMSO werden von der INCB28060-Platte auf die Assay-Platte überführt. Die Endkonzentration von DMSO beträgt 2 %. Lösungen von 8 nM unphosphoryliertem c-Met oder 0,5 nM phosphoryliertem c-Met werden in Assay-Puffer hergestellt. Eine 1 mM Stammlösung des Peptidsubstrats Biotin-EQEDEPEGDYFEWLE-amid, gelöst in DMSO, wird in Assay-Puffer, der 400 μM ATP (unphosphoryliertes c-Met) oder 160 uM ATP (phosphoryliertes c-Met) enthält, auf 1 μM verdünnt. Ein Volumen von 20 μL Enzymlösung (oder Assay-Puffer für den Enzymblindwert) wird zu den entsprechenden Wells in jeder Platte gegeben und dann 20 μL/Well Substratlösung, um die Reaktion zu initiieren. Die Platte wird vor Licht geschützt und bei 25 °C für 90 Minuten inkubiert. Die Reaktion wird durch Zugabe von 20 μL einer Lösung, die 45 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 0,4 mg/ml BSA, 200 nM SA-APC und 3 nM EUPy20 enthält, gestoppt. Die Platte wird 15-30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und HTRF (homogene zeitaufgelöste Fluoreszenz) wird auf einem Perkin Elmer Fusion α-FP Instrument gemessen. Die verwendeten HTRF-Programmeinstellungen sind wie folgt: Primärer Anregungsfilter 330/30, Primärfenster: 200 μSek, Primärverzögerung: 50 μSek, Anzahl der Blitze: 15, Well-Lesezeit: 2000

• Zelllinien

  H441 cells

• Konzentrationen

  0.24, 1, 4, 16, 63 nM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  H441 cells are seeded in RPMI-1640 medium containing 10% FBS and grown to complete confluence. Gaps are introduced by scraping cells with a P200 pipette tip. Cells are then stimulated with 50 ng/mL recombinant human HGF to induce migration across the gap in the presence of various concentrations of this compound. After an overnight incubation, representative photographs are taken and a semiqualitative assessment of inhibition of cell migration is conducted.

• Tiermodelle

  Eight-week-old female Balb/c nu/nu mice (Charles River) are inoculated subcutaneously with 4 × 10⁶ tumor cells (S114 model) or with 5 × 10⁶ tumor cells (U-87MG glioblastoma model).

• Dosierungen

  3, 10, 30 mg/kg

• Verabreichung

  INCB28060 is orally dosed, twice each day.