JC-1

1. Nehmen Sie die 6-Well-Platte als Beispiel für die Zellplattierung, und die Dichte beträgt 5 ×10^5/mL. Inkubieren Sie über Nacht in einem 5% CO2-Inkubator bei 37℃.
Hinweis: Es wird empfohlen, dass die Zelldichte während der Apoptose-Induktion 1 ×10^6/ml nicht überschreitet, was auch entsprechend Ihrem eigenen Zelltyp auf die geeignete Dichte kultiviert werden kann.
2. Nehmen Sie 0,5 mL Suspension in ein steriles Zentrifugenröhrchen; 400 g Zentrifugation für 3-5 min; Überstand verwerfen.
3. Die Zellen wurden mit 1ml dieser compound Arbeitslösung resuspendiert und in einem 5% CO2-Inkubator bei 37℃ für 15-30 min inkubiert.
4. Zentrifugation bei Raumtemperatur für 5 min bei 400 g; Überstand absaugen.
5. Die Zellen wurden mit 2 ml Zellkulturmedium oder Puffer resuspendiert und dann bei Raumtemperatur für 5 min bei 400 g zentrifugiert; Überstand verwerfen und zweimal wiederholen.
6. Resuspendieren Sie die Zellen mit 1 ml frischem Kulturmedium oder Puffer und führen Sie sofort die anschließende Durchflusszytometrie oder Fluoreszenzmikroskopie-Beobachtung durch.
7. Datenanalyse (Durchflusszytometrie): Mitochondrien gesunder Zellen, die rote Aggregate dieser compound enthalten, wurden durch den FL2-Kanal detektiert; Apoptotische oder ungesunde Zellen, die grünes Monomer dieser compound enthalten, wurden durch den FL1 (FITC)-Kanal detektiert.
8. Bei Verwendung für ein Enzymmarkierungsinstrument 300 μL Puffer-resuspendierte Zellen verwenden; Dann 100 pro Loch μ Die gefärbten Zellen in eine lichtdichte 96-Well-Platte mit der Menge an L überführen und anschließend eine Analyse der fluoreszierenden Enzymmarkerplatte durchführen.

• Zelllinien

  hippocampal neurons and glial cells

• Konzentrationen

  1 μg/ml

• Inkubationszeit

  15 min

• Methode

  JC-1 is dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) as a 2 mg/ml stock. This compound is excited at 490 nm and an optical image splitter device is attached to the microscope to separate spectrally the green and red components of its fluorescence.