L-685,458

Katalog-Nr.S7673 Charge:S767301

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Technische Daten

Formel

C₃₉H₅₂N₄O₆

Molekulargewicht

672.85

CAS-Nr.

292632-98-5

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (148.62 mM)

Ethanol

6 mg/mL (8.91 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	5.000mg/ml (7.43mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	5.000mg/ml (7.43mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

L-685,458 ist ein spezifischer und potenter Inhibitor der A beta PP gamma-Secretase-Aktivität mit einem K_i von 17 nM.

Ziele

gamma-secretase

17 nM(Ki)

In vitro

L-685,458 hemmt die Aβ(40)-Bildung sowohl in Neuro2A- als auch in CHO-Zelllinien, die humanes AβPP695 überexprimieren, sowie in SHSY5Y-Zellen, die das Konstrukt spβA4CTF überexprimieren, mit IC50-Werten von 402 nM, 113 nM bzw. 48 nM, wobei die Potenz zur Reduktion von Aβ(42) etwa 2-fach geringer ist. In Tca8113-Zellen hemmt diese Verbindung das Zellwachstum durch Induktion eines G0–G1-Zellzyklusarrests und Apoptose. In einer T-Zell-akuten lymphoblastischen Leukämie-Zelllinie verbessert die Vorbehandlung mit dieser Chemikalie die antiproliferative Wirkung von Imatinib. Es reduziert auch die HSV-1-Replikation in der Gewebekultur signifikant, indem es die Signalpeptidpeptidase (SPP) hemmt.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	HTRF-Immunoassay zur Aβ-Quantifizierung Die homogene zeitaufgelöste Fluoreszenz (HTRF)-Immunoassay-Methodik verwendet den Fluoreszenzresonanzenergietransfer (FRET) zwischen zwei Fluorophoren, einem Donor EuK und einem modifizierten Allophycocyanin-Pigmentakzeptormolekül, XL-665. Bei Annäherung findet ein nicht-strahlender FRET vom stickstofflaser-angeregten EuK zu XL-665 statt, was zur Emission eines verstärkten, langlebigen Fluoreszenzsignals führt. Kurz gesagt, in einem typischen 96-Well-Plattenassay enthält jede Vertiefung 0,75 nM Antikörper-EuK, 1,0 nM Antikörper-Biotin, 2,0 nM SA-XL665 und 0,1–0,2 M Kaliumfluorid. Proben von konditioniertem Zellkulturmedium oder synthetischen Peptidstandards und Kulturmedium allein werden hinzugefügt, um ein Gesamtassayvolumen von 200 μL/Vertiefung zu ergeben. Blindwerte werden durch die Zugabe von 1,0 nM nicht-biotinyliertem Antikörper anstelle des biotinylierten Antikörpers bestimmt. Nach dem Mischen wird die Reaktionsmischung bei 4 °C belassen, um das Gleichgewichtsbinden zu erreichen, und dann auf dem Discovery HTRF-Mikroplattenanalysator des Herstellers abgelesen.
Zell-Assay:^{^[2]}	Zelllinien Tca8113 cells Konzentrationen ~5.0 μM Inkubationszeit 48 h Methode The in vitro growth rate of Tca8113 cells treated with L-685,458, is measured by MTT. Briefly, Tca8113 cells are seeded in 96-well plates. On the day of harvest, 100 μL of spent medium is replaced with an equal volume of fresh medium containing 10% MTT 5 mg ml−1 stock. Plates are incubated at 37°C for 4 h, then 100 μl of DMSO is added to each well, and then plates are shaken at room temperature for 10 min. The absorbance is measured at 570 nm.

Kinase-Assay:^{^[1]}

HTRF-Immunoassay zur Aβ-Quantifizierung
Die homogene zeitaufgelöste Fluoreszenz (HTRF)-Immunoassay-Methodik verwendet den Fluoreszenzresonanzenergietransfer (FRET) zwischen zwei Fluorophoren, einem Donor EuK und einem modifizierten Allophycocyanin-Pigmentakzeptormolekül, XL-665. Bei Annäherung findet ein nicht-strahlender FRET vom stickstofflaser-angeregten EuK zu XL-665 statt, was zur Emission eines verstärkten, langlebigen Fluoreszenzsignals führt. Kurz gesagt, in einem typischen 96-Well-Plattenassay enthält jede Vertiefung 0,75 nM Antikörper-EuK, 1,0 nM Antikörper-Biotin, 2,0 nM SA-XL665 und 0,1–0,2 M Kaliumfluorid. Proben von konditioniertem Zellkulturmedium oder synthetischen Peptidstandards und Kulturmedium allein werden hinzugefügt, um ein Gesamtassayvolumen von 200 μL/Vertiefung zu ergeben. Blindwerte werden durch die Zugabe von 1,0 nM nicht-biotinyliertem Antikörper anstelle des biotinylierten Antikörpers bestimmt. Nach dem Mischen wird die Reaktionsmischung bei 4 °C belassen, um das Gleichgewichtsbinden zu erreichen, und dann auf dem Discovery HTRF-Mikroplattenanalysator des Herstellers abgelesen.

Zell-Assay:^{^[2]}

Zelllinien
Tca8113 cells
Konzentrationen
~5.0 μM
Inkubationszeit
48 h
Methode
The in vitro growth rate of Tca8113 cells treated with L-685,458, is measured by MTT. Briefly, Tca8113 cells are seeded in 96-well plates. On the day of harvest, 100 μL of spent medium is replaced with an equal volume of fresh medium containing 10% MTT 5 mg ml−1 stock. Plates are incubated at 37°C for 4 h, then 100 μl of DMSO is added to each well, and then plates are shaken at room temperature for 10 min. The absorbance is measured at 570 nm.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10913280/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17944672/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18951834/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24768597/

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Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ , , Sci Rep, 2017 , 7(1):4983 ]

: Daten von [ , , PLoS One, 2017, 12(3):e0173240 ]

Sellecks L-685,458 Wurde zitiert von 4 Publikationen

Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182]	PubMed: 36248745
Carboxy-terminal fragment of amyloid precursor protein mediates lipid droplet accumulation upon γ-secretase inhibition [ Biochem Biophys Res Commun, 2021, 570:137-142]	PubMed: 34280617
A novel rhamnoside derivative PL402 up-regulates matrix metalloproteinase 3/9 to promote Aβ degradation and alleviates Alzheimer's-like pathology. [ Aging (Albany NY), 2020, 12(1):481-501]	PubMed: 31901901
A cellular complex of BACE1 and γ-secretase sequentially generates Aβ from its full-length precursor. [ J Cell Biol, 2019, 218(2):644-663]	PubMed: 30626721

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