LDN-57444

Katalog-Nr.S7135 Charge:S713501

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Technische Daten

Formel

C₁₇H₁₁Cl₃N₂O₃

Molekulargewicht

397.64

CAS-Nr.

668467-91-2

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

11 mg/mL (27.66 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	6.000mg/ml (15.09mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 120 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	0.500mg/ml (1.26mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

LDN-57444 ist ein reversibler, kompetitiver Proteasom-Inhibitor für Uch-L1 mit einer IC50 von 0,88 μM und einer 28-fachen Selektivität gegenüber der Isoform Uch-L3.

Ziele

UCH-L1	UCH-L1	UCH-L3
0.4 μM(Ki)	0.88 μM	25 μM

In vitro

Die Behandlung mit 50 μM LDN-57444 für 24 Stunden führt zu einer 70%igen Hemmung der Proteasomaktivität. Diese Verbindung verursacht eine signifikante und konzentrationsabhängige Abnahme der Zellviabilität bei Konzentrationen über 25 μM, wobei die Zellviabilität bei 50 μM auf 61,81 % reduziert wird. Es ist in der Lage, den Zelltod über den Apoptoseweg zu verursachen, indem es die Aktivität des Ubiquitin-Proteasom-Systems verringert und die Spiegel von stark ubiquitinierten Proteinen erhöht, wobei beides die Entfaltungs-Protein-Antwort aktivieren kann. Die durch diese Chemikalie induzierte Apoptose kann durch die Aktivierung von endoplasmatischem Retikulumstress (ERS) ausgelöst werden.

In vivo

LDN-57444 verursacht in vivo dramatische Veränderungen in der synaptischen Proteindistribution und der Spindelmorphologie. Die Behandlung mit dieser Verbindung führt auch zu einem schnellen Abfall der Uch-L1-Aktivität, aber die Proteasome-Hemmung hat über mehrere Stunden hinweg keine Auswirkung auf die cAMP-Spiegel.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	HTS-Screening Um einen Assay zu starten, werden 0,5 μL einer 5 mg/mL Testverbindung (etwa 50 μM finale Reaktionskonzentration) oder DMSO-Kontrolle in jede Vertiefung aliquotiert. Sowohl Enzym als auch Substrat werden in UCH-Reaktionspuffer (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT und 0,5 mg/mL Ovalbumin) hergestellt. Anschließend werden 25 μL 0,6 nM UCH-L1 zu jeder Vertiefung gegeben, außer zu den Substratkontrollvertiefungen, gefolgt von 45–60 Sekunden Platten-Schütteln auf einem automatischen Schüttler. Die Enzym/Verbindungs-Mischung wird 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, bevor 25 μL 200 nM Ub-AMC hinzugefügt werden, um die Enzymreaktion zu initiieren. Die Reaktionsmischung (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitin-AMC mit 2,5 μg Testverbindung) wird weitere 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, bevor die Reaktion durch Zugabe von 10 μL 500 mM Essigsäure pro Vertiefung abgebrochen wird. Die Fluoreszenzemissionsintensität wird auf einem LJL Analyst unter Verwendung eines Cumarinfiltersets (ex = 365 nm, em = 450 nm) gemessen und von der intrinsischen Verbindungsfluoreszenz subtrahiert, um die Enzymaktivität zu ermitteln. Eine DMSO-Kontrolle (0,5 μL DMSO, 25 μL UCH-L1, 25 μL Ubiquitin-AMC, 10 μL Essigsäure), Enzymkontrolle (25 μL UCH-L1, 25 μL Puffer, 10 μL Essigsäure), Substratkontrolle (25 μL Puffer, 25 μL Ubiquitin-AMC, 10 μL Essigsäure) und Inhibitor-Kontrolle (0,5 μL Ubiquitin-Aldehyd [100 nM Stock], 25 μL UCH-L1, 25 μL Ubiquitin-AMC, 10 μL Essigsäure) werden ebenfalls in jeder Assayplatte durchgeführt, um Qualität und Reproduzierbarkeit zu gewährleisten. Potenzielle UCH-L1-Inhibitoren werden ausgewählt, wenn die Verbindungen eine größere Hemmung als 60 % im Vergleich zu den Kontrollen zeigten. Die enzymatischen UCH-L1-Reaktionen werden manuell zweimal unter Verwendung desselben Protokolls wiederholt, um die Ergebnisse für die Treffer-Verbindungen aus dem primären robotergestützten Screening zu bestätigen.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien H1299 Konzentrationen ~5 μM Inkubationszeit 24 h Methode MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Kinase-Assay:^{^[1]}

HTS-Screening
Um einen Assay zu starten, werden 0,5 μL einer 5 mg/mL Testverbindung (etwa 50 μM finale Reaktionskonzentration) oder DMSO-Kontrolle in jede Vertiefung aliquotiert. Sowohl Enzym als auch Substrat werden in UCH-Reaktionspuffer (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT und 0,5 mg/mL Ovalbumin) hergestellt. Anschließend werden 25 μL 0,6 nM UCH-L1 zu jeder Vertiefung gegeben, außer zu den Substratkontrollvertiefungen, gefolgt von 45–60 Sekunden Platten-Schütteln auf einem automatischen Schüttler. Die Enzym/Verbindungs-Mischung wird 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, bevor 25 μL 200 nM Ub-AMC hinzugefügt werden, um die Enzymreaktion zu initiieren. Die Reaktionsmischung (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitin-AMC mit 2,5 μg Testverbindung) wird weitere 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, bevor die Reaktion durch Zugabe von 10 μL 500 mM Essigsäure pro Vertiefung abgebrochen wird. Die Fluoreszenzemissionsintensität wird auf einem LJL Analyst unter Verwendung eines Cumarinfiltersets (ex = 365 nm, em = 450 nm) gemessen und von der intrinsischen Verbindungsfluoreszenz subtrahiert, um die Enzymaktivität zu ermitteln. Eine DMSO-Kontrolle (0,5 μL DMSO, 25 μL UCH-L1, 25 μL Ubiquitin-AMC, 10 μL Essigsäure), Enzymkontrolle (25 μL UCH-L1, 25 μL Puffer, 10 μL Essigsäure), Substratkontrolle (25 μL Puffer, 25 μL Ubiquitin-AMC, 10 μL Essigsäure) und Inhibitor-Kontrolle (0,5 μL Ubiquitin-Aldehyd [100 nM Stock], 25 μL UCH-L1, 25 μL Ubiquitin-AMC, 10 μL Essigsäure) werden ebenfalls in jeder Assayplatte durchgeführt, um Qualität und Reproduzierbarkeit zu gewährleisten. Potenzielle UCH-L1-Inhibitoren werden ausgewählt, wenn die Verbindungen eine größere Hemmung als 60 % im Vergleich zu den Kontrollen zeigten. Die enzymatischen UCH-L1-Reaktionen werden manuell zweimal unter Verwendung desselben Protokolls wiederholt, um die Ergebnisse für die Treffer-Verbindungen aus dem primären robotergestützten Screening zu bestätigen.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
H1299
Konzentrationen
~5 μM
Inkubationszeit
24 h
Methode
MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14522054/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22514658/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16923396/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18622688/

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Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ , , J Cell Mol Med, 2017, 1-16 ]

Sellecks LDN-57444 Wurde zitiert von 13 Publikationen

Ubiquitin C-terminal hydrolase L1 promoted pro-angiogenic capacity of periodontal ligament stem cells via HIF-1α/YAP signaling in periodontitis [ Stem Cell Res Ther, 2025, 16(1):271]	PubMed: 40457476
Deficiency of UCHL1 results in insufficient decidualization accompanied by impaired dNK modulation and eventually miscarriage [ J Transl Med, 2024, 22(1):478]	PubMed: 38769534
The Suppression of Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L1 Promotes the Transdifferentiation of Auditory Supporting Cells into Hair Cells by Regulating the mTOR Pathway [ Cells, 2024, 13(9)737]	PubMed: 38727276
Stem Cell Properties of Gastric Cancer Stem-Like Cells under Stress Conditions Are Regulated via the c-Fos/UCH-L3/β-Catenin Axis [ Mol Cells, 2023, 46(8):476-485]	PubMed: 37460253
UCHL1 regulates inflammation via MAPK and NF-κB pathways in LPS-activated macrophages [ Cell Biol Int, 2021, 10.1002/cbin.11662]	PubMed: 34288216
Long-term inhibition of UCHL1 decreases hypertension and retinopathy in spontaneously hypertensive rats [ J Int Med Res, 2021, 49(6):3000605211020641]	PubMed: 34130526
The Deubiquitinating Enzyme UCHL1 Promotes Resistance to Pemetrexed in Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating Thymidylate Synthase [ Theranostics, 2020, 15;10(13):6048-6060]	PubMed: 32483437
Deubiquitination of CD36 by UCHL1 promotes foam cell formation [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):636]	PubMed: 32801299
Blockage of UCHL1 Activity Attenuates Cardiac Remodeling in Spontaneously Hypertensive Rats [ Hypertens Res, 2020, 10.1038/s41440-020-0486-1]	PubMed: 32541849
UCH-L1 inhibitor LDN-57444 hampers mouse oocyte maturation by regulating oxidative stress and mitochondrial function and reducing ERK1/2 expression [ Biosci Rep, 2020, 40(10)BSR20201308]	PubMed: 33030206

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