E7080 (Lenvatinib)

E7080, als potenter Inhibitor der In-vitro-Angiogenese, zeigt eine signifikante Hemmwirkung auf die VEGF/KDR- und SCF/Kit-Signalübertragung. Gemäß den In-vitro-Rezeptortyrosin- und Serin/Threonin-Kinase-Assays hemmt diese Verbindung Flt-1, KDR, Flt-4 mit einer IC50 von 22, 4,0 bzw. 5,2 nM. Zusätzlich zu diesen Kinasen hemmt diese Verbindung auch FGFR1- und PDGFR-Tyrosinkinasen mit einem IC50-Wert von 46, 51 bzw. 100 nM für FGFR1, PDGFRα und PDGFRβ. [1] Diese Verbindung hemmt potent die Phosphorylierung von VEGFR2 (IC50, 0,83 nM) und VEGFR3 (IC50, 0,36 nM) in HUVECs, die jeweils durch VEGF und VEGF-C stimuliert wird. [2] Eine aktuelle Studie zeigt, dass die Behandlung mit dieser Verbindung (sowohl bei 1 μM als auch bei 10 μM) zu einer signifikanten Hemmung der Zellmigration und -invasion führt, indem sie die FGFR- und PDGFR-Signalübertragung hemmt. [3]

Bei oraler Verabreichung in einem H146-Xenograft-Modell hemmt Lenvatinib (E7080) das Wachstum des H146-Tumors bei 30 und 100 mg/kg dosisabhängig und führt bei 100 mg/kg zu einer Tumorregression. Darüber hinaus verringert diese Verbindung bei 100 mg/kg die Mikrovaskulardichte stärker als die Behandlung mit Anti-VEGF-Antikörpern und Imatinib. [1] Sie hemmt signifikant das lokale Tumorwachstum in einem MDA-MB-231-Mamma-Fettpolster-Modell (m.f.p.) mit RTVs (berechnetes Tumorvolumen an Tag 8/Tumorvolumen an Tag 1) von 0,81 und reduziert sowohl Angiogenese als auch Lymphangiogenese etablierter metastatischer Knötchen des MDA-MB-231-Tumors in den Lymphknoten. [2]

• In-vitro-Kinase-Assay [1]

  Tyrosinkinase-Assays werden mittels HTRF (KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met, EGFR) und ELISA (PDGFRβ) unter Verwendung der rekombinanten Kinasedomänen der Rezeptoren durchgeführt. In beiden Assays werden 4 μL serieller Verdünnungen dieser Verbindung in einer 96-Well-Rundplatte mit 10 μL Enzym, 16 μL Poly(GT)-Lösung (250 ng) und 10 μL ATP-Lösung (1 μM ATP) gemischt (die Endkonzentration von DMSO beträgt 0,1%). In den Wells für Blanks wird kein Enzym hinzugefügt. In den Kontroll-Wells wird kein Prüfartikel hinzugefügt. Die Kinase-Reaktion wird durch Zugabe von ATP-Lösung zu jedem Well initiiert. Nach 30-minütiger Inkubation bei 30°C wird die Reaktion durch Zugabe von 0,5 M EDTA (10 μL/Well) zur Reaktionsmischung in jedem Well gestoppt. Verdünnungspuffer, der für den jeweiligen Kinase-Assay geeignet ist, wird zur Reaktionsmischung hinzugefügt. Im HTRF-Assay werden 50 μL der Reaktionsmischung auf eine 96-Well 1/2-Fläche schwarze EIA/RIA-Platte überführt, HTRF-Lösung (50 μL/Well) wird zur Reaktionsmischung hinzugefügt, und dann wird die Kinaseaktivität durch Messung der Fluoreszenz mit einem zeitaufgelösten Fluoreszenzdetektor bei einer Anregungswellenlänge von 337 nm und Emissionswellenlängen von 620 und 665 nm bestimmt. Im ELISA werden 50 μL der Reaktionsmischung in Avidin-beschichteten 96-Well-Polystyrolplatten bei Raumtemperatur 30 Minuten lang inkubiert. Nach dem Waschen mit Waschpuffer wird PY20-HRP-Lösung (70 μL/Well) hinzugefügt und die Reaktionsmischung 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert. Nach dem Waschen mit Waschpuffer wird TMB-Reagens (100 μL/Well) zu jedem Well hinzugefügt. Nach einigen Minuten (10–30 Minuten) wird 1 M H₃PO₄ (100 μL/Well) zu jedem Well hinzugefügt. Die Kinaseaktivität wird durch Messung der Absorption bei 450 nm mit einem Mikroplattenleser bestimmt.

• Zelllinien

  HUVECs

• Konzentrationen

  0-10 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  HUVECs (1,000 cells in each well in serum-free medium containing 2% fetal bovine serum) and L6 rat skeletal muscle myoblasts (5,000 cells in each well in serum-free DMEM) are dispensed in a 96-well plate and incubated overnight. This compound and either VEGF (20 ng/mL) or FGF-2 (20 ng/mL) containing 2% fetal bovine serum and PDGFβ (40 ng/mL) are added to each well. Cells are incubated for 3 days and then the ratios of surviving cells are measured by WST-1 reagent. For proliferation assay, samples are duplicated and three separate experiments are done.

• Tiermodelle

  H146 tumor cells are implanted subcutaneously (s.c.) into the flank region of female BALB/c nude mice.

• Dosierungen

  ≤100 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via p.o.