Maraviroc (UK-427857)

Maraviroc hemmt die MIP-1β-stimulierte γ-S-GTP-Bindung an HEK-293-Zellmembranen, was seine Fähigkeit zeigt, die Chemokin-abhängige Stimulation des GDP-GTP-Austauschs am CCR5/G-Proteinkomplex zu hemmen. Diese Verbindung hemmt auch das nachgeschaltete Ereignis der Chemokin-induzierten intrazellulären Kalziumumverteilung mit IC50-Werten zwischen 7 und 30 nM gegen MIP-1β, MIP-1α und RANTES. In den gleichen Experimenten löst es bei Konzentrationen bis zu 10 μM keine Freisetzung von intrazellulärem Kalzium aus, was darauf hindeutet, dass es frei von CCR5-Agonistenaktivität ist. Konsistent damit gelingt es dieser Chemikalie nicht, die CCR5-Internalisierung zu induzieren. Sie ist bei niedrigen nanomolaren Konzentrationen gegen HIV-1 Ba-L aktiv. Diese Verbindung hemmt alle 200 pseudotypisierten Viren mit einem geometrischen Mittel-IC90 von 13,7 nM. [1] Bei Konzentrationen >1000-mal der 50%igen Hemmkonzentration hemmte es andere Chemokinrezeptoren (CCR1, 2, 3, 4, 7 und 8; CXCR1 und 2) nicht in einem klinisch relevanten Ausmaß[3].

Die Halbwertszeiten von Maraviroc betragen 0,9 Stunden bei der Ratte und 2,3 Stunden beim Hund. Nach oraler Verabreichung (2 mg/kg) an den Hund trat die Cmax (256 ng/ml) 1,5 Stunden nach der Dosis auf, und die Bioverfügbarkeit betrug 40 %. Bei der Ratte werden etwa 30 % der verabreichten Dosis aus dem Darmtrakt resorbiert. [1] Weibliche RAG-hu-Mäuse werden vaginal mit HIV-1 eine Stunde nach intravaginaler Anwendung des Wirkstoffgels infiziert. Die mit diesem Gel behandelten Mäuse waren vollständig vor einer vaginalen HIV-1-Infektion geschützt, im Gegensatz zu Placebo-Gel-behandelten Mäusen, die alle infiziert wurden. Die vaginale Verabreichung dieser Verbindung schützt Mäuse vollständig vor einer vaginalen HIV-1-Infektion. Während bei Placebo-Gel-behandelten und viral infizierten Mäusen ein klares Muster des CD4-T-Zellrückgangs zu beobachten ist, bleiben ihre Werte bei Mäusen, die dieses chemische Gel erhalten, stabil. [2]

• Hemmung der Chemokin-Bindung an CCR5

  Die Bindung von ¹²⁵I-markiertem MIP-1α, MIP-1β und RANTES an CCR5 wird unter Verwendung intakter HEK-293-Zellen, die den Rezeptor stabil exprimieren, oder Membranpräparationen davon gemessen. Kurz gesagt, Zellen werden in Bindungspuffer (50 mM HEPES, der 1 mM CaCl₂, 5 mM MgCl₂ und 0,5 % Rinderserumalbumin [BSA] enthält und auf pH 7,4 eingestellt ist) auf eine Dichte von 2 × 10⁶ Zellen/ml resuspendiert. Für Membranpräparationen werden PBS-gewaschene Zellen in Lysepuffer (20 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 1 Tablette COMPLETE pro 50 ml, pH 7,4) resuspendiert, bevor sie in einem Polytron-Handhomogenisator homogenisiert, ultrazentrifugiert (40.000 × g für 30 min) und in Bindungspuffer auf eine Proteinkonzentration von 0,25 mg/ml resuspendiert werden (12,5 μg Membranprotein werden in jeder Vertiefung einer 96-Well-Platte verwendet). ¹²⁵I-radioaktiv markiertes MIP-1α, MIP-1β und RANTES werden hergestellt und in Bindungspuffer auf eine Endkonzentration von 400 pM im Assay verdünnt. Die Verdünnungen dieser Verbindung werden jeder Vertiefung auf ein Endvolumen von 100 μl zugesetzt, die Assayplatten inkubieren 1 Stunde lang, und die Inhalte werden durch vorblockierte und gewaschene Unifilter-Platten filtriert, die nach dem Trocknen über Nacht gezählt werden.

• Zelllinien

  PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells

• Konzentrationen

  0-1 μM

• Inkubationszeit

  5 days or 7 days

• Methode

  Drug susceptibility assays are performed in 24-well tissue culture plates. Duplicate eight-point dilution series of Maraviroc are prepared in DMSO and medium to yield a final DMSO concentration of 0.1% (vol/vol) in the assay. PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells are infected with virus for 1 hour at 37 °C. Cells are subsequently washed once, and 3.6 × 10⁵ PBMC or 2.0 × 10⁵ PM-1 cells are added to each well of assay plates containing diluted this compound. Plates are incubated for 5 days (lab-adapted strains) or 7 days (primary isolates) at 37 °C in a humidified 5% CO₂ (vol/vol) atmosphere.

• Tiermodelle

  Humanized BALB/c-Rag2−/−γc−/− and BALB/c-Rag1−/−γc−/− (RAG-hu) mice

• Dosierungen

  ~64 μg

• Verabreichung

  A 25 μL volume of the gel formulation is carefully applied in to the vaginal vault of mice.