MK-2206 Dihydrochloride

MK-2206 2HCl ist ein allosterischer Inhibitor und wird durch die Pleckstrin-Homologie-Domäne aktiviert. Diese Verbindung hemmt die Autophosphorylierung von Akt T308 und S473. Es verhindert auch die Akt-vermittelte Phosphorylierung nachgeschalteter Signalmoleküle, einschließlich TSC2, PRAS40 und ribosomaler S6-Proteine. [1] Diese Chemikalie hemmt Ras-Wildtyp (WT)-Zelllinien (A431, HCC827 und NCI-H292) stärker im Vergleich zu Ras-mutierten Zelllinien (NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299 und Calu-6). Es zeigt auch synergistische Reaktionen in Kombination mit zytotoxischen Mitteln in Lungen-NCI-H460- oder Ovarial-A2780-Tumorzellen. [2] MK-2206 oder siRNA-vermittelte Akt-Hemmung aktiviert stark die Autophagy in menschlichen Gliomzellen. Die Stilllegung des eukaryotischen Elongationsfaktors-2 (eEF-2) unterdrückt jedoch diese durch die Verbindung induzierte Autophagy, mit einer Förderung des apoptotischen Zelltods. [3]

MK-2206 2HCl zeigt bei einer Dosis von 240 mg/kg 60 % TGI und hemmt mehr als 70 % von Phospho-Akt1/2 (T308 und S473) in A2780-Ovarialkrebs-Xenografts. [1] Diese Verbindung zeigt in Kombination eine signifikante Antitumoraktivität im NCI-H292-Xenograft. [2]

• Akt-Kinasen-Assay

  Akt-Kinasen werden mittels eines von GSK abgeleiteten biotinylierten Peptidsubstrats getestet. Das Ausmaß der Peptidphosphorylierung wird mittels Homogeneous Time Resolved Fluorescence (HTRF) unter Verwendung eines Lanthaniden-Chelats (Lance)-gekoppelten monoklonalen Antikörpers, der spezifisch für das Phosphopeptid ist, in Kombination mit einem Streptavidin-verknüpften Allophycocyanin (SA-APC)-Fluorophor bestimmt, das an die Biotin-Einheit des Peptids bindet. Wenn sich Lance und APC in unmittelbarer Nähe befinden, findet ein nicht-strahlender Energietransfer von Lance zu APC statt, gefolgt von der Lichtemission von APC bei 655 nm. 10X Assay-Puffer: 500 mM HEPES, pH 7,5, 1 % PEG, 16,6 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 % BSA, 20 mM 9-Glycerolphosphat; Quench-Puffer 50 mM HEPES pH 7,3, 16,6 mM EDTA, 0,1 % BSA, 0,1 % Triton X-100, 0,17 nM markierter monoklonaler Antikörper, 0,0067 mg/mL SA-APC; ATP/MgCl₂-Arbeitslösung: 1X Assay-Puffer, 1 mM DTT, 1X PIC, 5 % Glycerin, aktives Akt; Peptid-Arbeitslösung: 1X Assay-Puffer, 1 mM DTT, 1X PIC, 5 % Glycerin, 2 TM GSK biotinyliertes Peptid. Die Reaktion wird durch Zugabe von 16 µL ATP/MgCl₂-Arbeitslösung zu den entsprechenden Wells zusammengebaut. MK-2206 2HCl oder Vehikel (1,0 µL) wird hinzugefügt, gefolgt von 10 µL Peptid-Arbeitslösung. Die Reaktion wird durch Zugabe von 13 μL der Enzym-Arbeitslösung gestartet und gemischt. Die Reaktion läuft 50 Minuten lang und wird dann durch Zugabe von 60 µL HTRF-Quench-Puffer gestoppt. Die gestoppten Reaktionen werden mindestens 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und dann im Instrument abgelesen.

• Zelllinien

  A431, HCC827, NCI-H292, NCI-H358, NCI-H23, NCI-H1299, Calu-6 and NCI-H460 cells

• Konzentrationen

  0, 0.3, 1 and 3 μM

• Inkubationszeit

  72 or 96 hours

• Methode

  MK-2206 2HCl is dissolved in DMSO as a stock solution and diluted by culture media before use. Cells are seeded at a density of 2-3 × 10³ in 96-well plates and incubated for 24 hours. Then this compound (0, 0.3, 1 and 3 μM) is added to the cells. Cell proliferation is determined after 72 or 96 hours.

• Tiermodelle

  SK-OV-3, NCI-H292, HCC70, PC-3, and NCI-H460 models in male CD1-nude mice

• Dosierungen

  120 mg/kg

• Verabreichung

  Orally administered