Datenblatt

Biologische Beschreibung

Spezifität	NCX1 Antibody [C23J23] detektiert endogene Spiegel des gesamten NCX1-Proteins.
Hintergrund	NCX1 (Natrium-Calcium-Austauscher 1) ist ein ubiquitär exprimiertes integrales Membranprotein, das für die zelluläre Ca²⁺-Homöostase entscheidend ist, insbesondere im Herzen und Gehirn, wo es intrazelluläres Ca²⁺ gegen extrazelluläres Na⁺ austauscht, um die Anregungs-Kontraktions-Kopplung und die neuronale Signalübertragung zu regulieren. Strukturell enthält NCX1 neun Transmembransegmente mit zwei α-Wiederholungsregionen (beteiligt an Ionenbindung und -transport) und einer großen intrazellulären Schleife zwischen TMS 5–6, die β-Wiederholungsregionen beherbergt, die regulatorisches Ca²⁺ binden. Es existiert in mehreren Spleißvarianten mit gewebespezifischen regulatorischen Phänotypen, wobei NCX1.1 die vorherrschende kardiale Isoform ist. Die NCX1-Funktion wird durch lokale Faktoren, Ionenkonzentrationen, Lipide und Phosphorylierung durch Kinasen wie PKA und PKC innerhalb eines makromolekularen Komplexes moduliert, der mAKAP, Phosphatasen (PP1, PP2A) und andere regulatorische Proteine enthält. In Kardiomyozyten ermöglicht diese Organisation eine präzise β-adrenerge Regulation, obwohl Veränderungen wie Hyperphosphorylierung und abgeschwächte Reaktionsfähigkeit bei Herzinsuffizienz auftreten, was seine Bedeutung sowohl unter physiologischen als auch pathologischen Bedingungen unterstreicht.

Spezifität

NCX1 Antibody [C23J23] detektiert endogene Spiegel des gesamten NCX1-Proteins.

Hintergrund

NCX1 (Natrium-Calcium-Austauscher 1) ist ein ubiquitär exprimiertes integrales Membranprotein, das für die zelluläre Ca²⁺-Homöostase entscheidend ist, insbesondere im Herzen und Gehirn, wo es intrazelluläres Ca²⁺ gegen extrazelluläres Na⁺ austauscht, um die Anregungs-Kontraktions-Kopplung und die neuronale Signalübertragung zu regulieren. Strukturell enthält NCX1 neun Transmembransegmente mit zwei α-Wiederholungsregionen (beteiligt an Ionenbindung und -transport) und einer großen intrazellulären Schleife zwischen TMS 5–6, die β-Wiederholungsregionen beherbergt, die regulatorisches Ca²⁺ binden. Es existiert in mehreren Spleißvarianten mit gewebespezifischen regulatorischen Phänotypen, wobei NCX1.1 die vorherrschende kardiale Isoform ist. Die NCX1-Funktion wird durch lokale Faktoren, Ionenkonzentrationen, Lipide und Phosphorylierung durch Kinasen wie PKA und PKC innerhalb eines makromolekularen Komplexes moduliert, der mAKAP, Phosphatasen (PP1, PP2A) und andere regulatorische Proteine enthält. In Kardiomyozyten ermöglicht diese Organisation eine präzise β-adrenerge Regulation, obwohl Veränderungen wie Hyperphosphorylierung und abgeschwächte Reaktionsfähigkeit bei Herzinsuffizienz auftreten, was seine Bedeutung sowohl unter physiologischen als auch pathologischen Bedingungen unterstreicht.

Nutzungsinformationen

Anwendung

IHC, FCM

Verdünnung

IHC	FCM
1:200	1:20 - 1:100

Reaktivität

Human

Quelle

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Lagerpuffer

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Lagerung
(Ab dem Datum des Erhalts)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Experimentelle Methoden
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Experimentelle Methoden

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12754202/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17303833/

Anwendungsdaten

IHC

Validiert von Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded human gastric cancer tissue with F2381 at 1:1000 dilution.