Neratinib (HKI-272)

Katalog-Nr.S2150 Charge:S215006

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Technische Daten

Formel

C30H29ClN6O3
Molekulargewicht 557.04 CAS-Nr. 698387-09-6
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO (mit 50 °C warmem Wasserbad erwärmt) 7 mg/mL (12.56 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Neratinib ist ein hochselektiver HER2- und EGFR-Inhibitor mit IC50-Werten von 59 nM und 92 nM in zellfreien Assays; er hemmt KDR und Src schwach, ohne signifikante Hemmung von Akt, CDK1/2/4, IKK-2, MK-2, PDK1, c-Raf und c-Met. Phase 3.
Ziele
HER2
(Cell-free assay)		 EGFR
(Cell-free assay)		 KDR
(Cell-free assay)		 Src
(Cell-free assay)
59 nM 92 nM 800 nM 1.4 μM
In vitro Neratinib hemmt die Tyrosinkinasen KDR und Src schwach mit IC50-Werten von 0,8 μM bzw. 1,4 μM, was einer 14- bzw. 24-fach geringeren Aktivität im Vergleich zu HER2 entspricht. Diese Verbindung zeigt keine Aktivität gegen andere Serin-Threonin-Kinasen wie Akt, Cyclin D1/cdk4, Cyclin E/cdk2, Cyclin B1/cdk1, IKK-2, MK-2, PDK1, c-Raf und Tpl-2, sowie die Tyrosinkinase c-Met. Es hemmt selektiv die Proliferation von 3T3-Zellen, die mit dem HER2 (3T3/neu) transfiziert sind, sowie von zwei anderen HER-2-überexprimierenden SK-Br-3- und BT474-Zellen mit IC50-Werten von 2-3 nM, was eine >230-fache Potenz im Vergleich zu nicht-transfizierten 3T3-Zellen sowie MDA-MB-435 und SW620, die EGFR- und HER2-negativ sind, zeigt. Diese Chemikalie hemmt auch die Proliferation von EGFR-abhängigen A431-Zellen mit einem IC50 von 81 nM. Sie reduziert die HER2-Rezeptor-Autophosphorylierung in BT474-Zellen mit einem IC50 von 5 nM und die EGF-abhängige Phosphorylierung von EGFR in A431-Zellen mit einem IC50 von 3 nM. Die Blockierung von HER-2 durch diese Verbindung führt zur Hemmung der nachgeschalteten MAPK- und Akt-Signalwege mit einem IC50 von 2 nM, was potenter ist als Trastuzumab. Es hemmt die Cyclin-D1-Expression und die Phosphorylierung des Rb-Suszeptibilitätsgenprodukts in BT474-Zellen mit einem IC50 von 9 nM, was zu einem G1-S-Arrest und letztendlich einer verminderten Zellproliferation führt.
In vivo Die orale Verabreichung von Neratinib hemmt signifikant das Wachstum von 3T3/neu-Xenografts, mit einer Hemmung von 34 %, 53 %, 98 % und 98 % bei Dosen von 10, 20, 40 und 80 mg/kg/Tag. In Übereinstimmung mit der Hemmung der HER-2-Phosphorylierung um 84 % innerhalb von 1 Stunde nach Verabreichung von 40 mg/kg/Tag hemmt diese Verbindung das Wachstum von BT474-Xenografts um 70-82 %, 67 % und 93 % bei Dosen von 5, 10 und 40 mg/kg/Tag. Es ist auch wirksam gegen SK-OV-3-Xenografts mit einer Hemmung von 31 % und 85 % bei 5 bzw. 60 mg/kg/Tag. Diese Chemikalie ist weniger potent gegen EGFR-abhängige A431-Xenografts als gegen HER-2-abhängige Tumoren, mit 32 % und 44 % Hemmung bei 5 bzw. 20 mg/kg/Tag. Sie zeigt wenig Aktivität gegen MCF-7- und MX-1-Xenografts, die niedrige Mengen an HER-2 und EGFR exprimieren, mit nur 28 % Hemmung bei 80 mg/kg/Tag, was darauf hindeutet, dass sie eine selektive Aktivität für Zellen aufweist, die HER-2 oder EGFR exprimieren.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Zellfreier Autophosphorylierungs-Assay mittels zeitaufgelöster Fluorometrie

    Neratinib wird als 10 mg/mL Stammlösung in DMSO hergestellt und in 25 mM HEPES (pH 7,5; 0,002 ng/mL-20 μg/mL) verdünnt. Gereinigte rekombinante COOH-terminale Fragmente von HER2 (Aminosäuren 676-1255) oder epidermalem Wachstumsfaktorrezeptor (EGFR) (Aminosäuren 645-1186) [verdünnt in 100 mM HEPES (pH 7,5) und 50 % Glycerin] werden mit steigenden Konzentrationen dieser Verbindung in 4 mM HEPES (pH 7,5), 0,4 mM MnCl2, 20 μM Natriumvanadat und 0,2 mM DTT für 15 Minuten bei Raumtemperatur in 96-Well-ELISA-Platten inkubiert. Die Kinase-Reaktion wird durch die Zugabe von 40 μM ATP und 20 mM MgCl2 initiiert und für 1 Stunde bei Raumtemperatur fortgesetzt. Die Platten werden gewaschen, und die Phosphorylierung wird unter Verwendung Europium-markierter Anti-Phospho-Tyrosin-Antikörper (15 ng/Well) nachgewiesen. Nach den Wasch- und Anreicherungsschritten wird das Signal mit einem Victor2-Fluoreszenzleser (Anregungswellenlänge 340 nm, Emissionswellenlänge 615 nm) detektiert. Die Konzentration dieser Chemikalie, die die Rezeptorphosphorylierung um 50 % hemmt (IC50), wird aus den Hemmkurven berechnet.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    3T3, 3T3/neu, A431, BT474, SK-Br-3, MDA-MB-435, and SW480

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations 0.5 ng/mL-5 μg/mL

  • Inkubationszeit

    2 or 6 days

  • Methode

    Cells are exposed to various concentrations of Neratinib for 2, or 6 days. Cell proliferation is determined using sulforhodamine B, a protein binding dye. Briefly, cells are fixed with 10% trichloroacetic acid and washed extensively with water. Cells are then stained with 0.1% sulforhodamine B and washed in 5% acetic acid. Protein-associated dye is solubilized in 10 mM Tris, and absorbance is measured at 450 nM. The concentration of this compound that inhibits cell proliferation by 50% (IC50) is determined from inhibition curves.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Female athymic (nude) mice implanted s.c. with 3T3/neu, BT474, MCF-7, or SK-OV-3 cells

  • Dosierungen

    ~80 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Gavage

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15173008/

Kundenproduktvalidierung

<p>HER2 mutations V777L, D769H, V842I, G309A induce gain-of-function over HER2 WT in MCF10A mammary epithelial cells. B, HER2 WT, L755S, and del.755–759 cells were grown in Matrigel in the presence of DMSO vehicle (0.5%), neratinib (0.5  μmol/L) or gefitinib (0.5  μmol/L). Phase contrast images were obtained as in A. C,  MCF10A-HER2 WT or mutants were seeded in soft agar. After 7 days of growth, they were treated with DMSO vehicle (0.5%), lapatinib (0.5 μmol/L) or neratinib (0.5 μmol/L) for an additional week. Error bars represent 95% highest posterior density intervals. *, Significant difference between the HER2 mutant and HER2 WT; #, the effect of inhibitor treatment was significant (95% highest posterior density interval did not contain 0 for both).  D, photomicrographs of the colonies in soft agar on day 12, magnification ×40. </p>

Daten von [ Cancer Discov , 2013 , 3, 224-37 ]

<p> </p><div>Differential sensitivity of EGFR-mutant glioma and lung cancer cell lines to the irreversible EGFR inhibitors HKI-272 and CI-1033. A, HKI-272 induces cell death in GBM cells with EGFR EC mutation (SKMG3, SF268) but not EGFR wild-type (WT EGFR) cancer cell lines or astrocytes (NHA). Cell death was assessed by trypan blue exclusion after 5 days of inhibitor treatment. Cells lines in black express wild-type EGFR, whereas those in red contain EGFR EC mutations.</div>

Daten von [ Cancer Discov , 2012 , 2, 458-471 ]

<p> </p><div>Differential sensitivity of EGFR-mutant glioma and lung cancer cell lines to the irreversible EGFR inhibitors HKI-272 and CI-1033. C, HKI-272 is more potent than CI-1033 in blocking EGFR phosphorylation in SKMG3 cells with EGFR EC mutation. SKMG3 cells were treated with the indicated doses of CI-1033 or HKI-272, and whole lysates were analyzed by immunoblot with the indicated antibodies.</div>

Daten von [ Cancer Discov , 2012 , 2, 458-471 ]

(C, D) Cells were treated as mentioned above for the indicated times and processed for immunofluorescence experiments with anti-ErbB2 antibody (green). Nuclei were stained with DAPI (blue). Examples of intracellular ErbB2 punctae are indicated with yellow triangles. Scale bar = 10 μm.

Daten von [ , , Cancer Lett, 2016, 382(2):176-185 ]

Sellecks Neratinib (HKI-272) Wurde zitiert von 116 Publikationen

APOBEC3 mutagenesis drives therapy resistance in breast cancer [ Nat Genet, 2025, 57(6):1452-1462] PubMed: 40379787
Sevabertinib, a Reversible HER2 Inhibitor with Activity in Lung Cancer [ Cancer Discov, 2025, 10.1158/2159-8290.CD-25-0605] PubMed: 41090369
Small molecule kinase inhibitor altiratinib inhibits brain cyst forming bradyzoites of Toxoplasma gondii [ J Microbiol, 2025, 63(2):e2409001] PubMed: 40044130
KinoViz: A User-Friendly Web Application for High-Throughput Kinome Profiling Analysis and Visualization in Cancer Research [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-6431257] PubMed: 40630533
Hotspot mutations in HER2 interfaces destabilize structure, causing breast cancer treatment failure [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-5931887] PubMed: 40166021
Proteogenomic analysis dissects early-onset breast cancer patients with prognostic relevance [ Exp Mol Med, 2024, 56(11):2382-2394] PubMed: 39482530
Peptidylarginine deiminase 3 modulates response to neratinib in HER2 positive breast cancer [ Oncogenesis, 2024, 13(1):30] PubMed: 39097594
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Synergistic Effects of Neratinib in Combination With Palbociclib or Miransertib in Brain Cancer Cells [ World J Oncol, 2024, 15(3):492-505] PubMed: 38751701
The Combination of Afatinib With Dasatinib or Miransertib Results in Synergistic Growth Inhibition of Stomach Cancer Cells [ World J Oncol, 2024, 15(2):192-208] PubMed: 38545471

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