NH125

Katalog-Nr.S7436 Charge:S743601

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Technische Daten

Formel

C27H45IN2
Molekulargewicht 524.56 CAS-Nr. 278603-08-0
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (190.63 mM)
Ethanol 100 mg/mL (190.63 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung NH125 ist ein selektiver eEF-2-Kinase-Inhibitor mit einer IC50 von 60 nM, einer >125-fachen Selektivität gegenüber PKC, PKA und CaMKII, und auch ein potenter Histidinkinase-Inhibitor.
Ziele
eEF-2 kinase
60 nM
In vitro In C6-Gliomzellen verringert NH125 den zellulären Gehalt an Phospho-eEF-2, ohne den Gesamtgehalt an eEF-2 zu beeinflussen, und blockiert den Zellzyklusübergang an der G1-S-Grenze. Diese Verbindung hemmt potent die Zellviabilität von 10 Krebszellen mit einer IC50 im Bereich von 0,7 bis 4,8 μM. Sie hemmt effektiv Histidin-Proteinkinasen, einschließlich Envz, PhoQ, BvgS, EvgS, und erzeugt somit potente antibakterielle Aktivitäten gegen Oxacillin-resistenten Staphylococcus aureus (ORSA), Vancomycin-resistenten Enterococcus faecalis (VRE), Penicillin-resistenten Streptococcus pneumoniae (PRS) und andere grampositive und gramnegative Bakterien. Die Hemmung der EEF2K durch diese Chemikalie macht Tumorzellen empfindlicher gegenüber Curcumin und Velcade, die eine ER-Stress-induzierende Wirkung besitzen.
In vivo NH125 reduziert den Blutdruck bei SHR und die ROS-Produktion, die Induktion entzündlicher Moleküle und die Hypertrophie in der Arteria mesenterica superior von SHR.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • eEF-2-Kinase-Assay

    Die eEF-2-Kinase-Aktivität wird mit zwei Methoden gemessen: (a) einem filterbasierten Assay; und (b) mittels Immunoblotting unter Verwendung eines Antiphospho-eEF2-Antikörpers. Für beide werden Reaktionen in einem Gesamtvolumen von 20 μl durchgeführt, das 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1,5 mM CaCl2, 100 μg/ml Calmodulin, 2 μM His-markiertes eEF-2 und 400 nM GST-eEF-2-Kinase sowie ATP-Mischung [50 μM ATP mit 1μCi (γ-33P)ATP] enthält. Die Kinase-Mischung ohne ATP wird auf Eis vorbereitet und dann 15 Minuten bei Raumtemperatur vorinkubiert. Kinase-Reaktionen werden durch Zugabe von ATP gestartet und 30 Minuten bei 30 °C ablaufen gelassen. Für den filterbasierten Assay wird die Reaktion durch Zugabe von 20 μl kalter 1,5%iger Phosphorsäure beendet, und 5 μl der Reaktion werden auf P81 Whatman Phosphocellulosepapier aufgetragen. Das Papier wird dreimal in 500 ml 0,5%iger Phosphorsäure und einmal mit 200 ml Aceton gewaschen. Das Papier wird dann luftgetrocknet und in 10 ml Szintillationsmischung getaucht. Die Radioaktivität wird mit einem Beckton-Dickinson Flüssigszintillationszähler gezählt. Für das Immunoblotting werden die Reaktionen durch Zugabe von 20 μl 3× Lamelli-Puffer [190 mM Tris (pH 6,8), 6% SDS, 30% Glycerin, 15% 2-Mercaptoethanol und 0,003% Bromphenolblau-Farbstoff] gestoppt. Proben werden 5 Minuten gekocht und mittels 7%iger SDS-PAGE aufgetrennt und wie unten beschrieben für das Western Blotting verarbeitet. Die Bedingungen für beide Assays werden so gewählt, dass die Linearität der Reaktion in Bezug auf die Inkubationszeit und die Enzymkonzentration gewährleistet ist.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    C6, T98-G, U-138 MG, U-87 MG, A172, A2780, HeLa, PC3, OVCAR-3, MCF-7 cell lines.

  • Konzentrationen

    ~10 μM

  • Inkubationszeit

    48-72 hours

  • Methode

    The viability of cells is measured using an MTT assay. Briefly, 5 × 104 cells are plated in 96-well plates and exposed to various concentrations of this compound for 48–72 h. The formazan product formed after 4 h incubation with MTT is dissolved in 100% DMSO and read at 550 nM using a Dynatech Microplate Reader MR5000.
Tierstudie:

[4]
  • Tiermodelle

    Spontaneously hypertensive rats (SHR)

  • Dosierungen

    ~500 μg/kg/day

  • Verabreichung

    s.c.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14583488/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10830522/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23182879/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23812389/

Kundenproduktvalidierung

MDA-MB-231 or T47D cells were pretreated with 300 nM NH125 for 1 h, followed by treatment with 8 μM TBMS1 for 24 h. The protein levels were measured by Western blot.

Daten von [ , , Acta Pharmacol Sin, 2018, doi：10.1038/s41401-018-0165-9 ]

NH125 sensitizes NPC cells to lapatinib. NPC cells were treated with lapatinib or DMSO for 48 h in the presence or absence of 0.25 μM NH125. Cell viability was assessed by the CCK-8 assay. Results are expressed as means±standard deviation. *, P<0.05;**, P<0.01 and ***, P<0.001.

Daten von [ , , BMC Cancer, 2016, 16(1):813. ]

CNE-2 cultured in medium supplemented with 10% FBS was treated with a series of concentrations of MK-2206 for 72 hours in the presence or absence of 20 μM HCQ and 0.25 μM NH125. Cleaved caspase-3 was measured by Western blotting, and β-actin was used as a loading control.

Daten von [ , , Drug Des Devel Ther, 2018, 12:2655-2663 ]

Sellecks NH125 Wurde zitiert von 3 Publikationen

Tubeimoside-1, a triterpenoid saponin, induces cytoprotective autophagy in human breast cancer cells in vitro via Akt-mediated pathway [Jiang SL Acta Pharmacol Sin, 2018, 10.1038/s41401-018-0165-9] PubMed: 30315250
Inhibiting eEF-2 kinase-mediated autophagy enhanced the cytocidal effect of AKT inhibitor on human nasopharyngeal carcinoma [Zhao YY Drug Des Devel Ther, 2018, Drug Des Devel Ther] PubMed: 30214154
Inhibition of eEF-2 kinase sensitizes human nasopharyngeal carcinoma cells to lapatinib-induced apoptosis through the Src and Erk pathways [Liu L, et al. BMC Cancer, 2016, 16(1):813] PubMed: 27756261

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