Nirogacestat (PF-03084014)

Katalog-Nr.S8018 Charge:S801802

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Technische Daten

Formel

C27H41F2N5O
Molekulargewicht 489.64 CAS-Nr. 1290543-63-3
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (198.1 mM)
Ethanol 97 mg/mL (198.1 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Nirogacestat (PF-03084014, PF-3084014) ist ein selektiver gamma-secretase-Inhibitor mit einer IC50 von 6,2 nM in einem zellfreien Assay und induziert apoptosis. Phase 2.
Ziele
gamma-secretase
(cell-free assay)
6.2 nM
In vitro Nirogacestat (PF-03084014) hemmt die Spaltung des Notch-Rezeptors in zellulären Assays unter Verwendung von HPB-ALL-Zellen, die Mutationen sowohl in den Heterodimerisierungs- als auch in den PEST-Domänen in Notch1 aufweisen, mit einer IC50 von 13,3 nM. Es reguliert die Notch-Zielgene Hes-1 und cMyc in HPB-ALL-Zellen mit einer IC50 von <1 nM bzw. 10 nM herunter und hemmt das Zellwachstum einer Untergruppe menschlicher T-ALL-Zelllinien (HPB-ALL, DND-41, TALL-1 und Sup-T1) durch Induktion von Zellzyklusarrest und Apoptose mit IC50-Werten von 30–100 nM. Diese Verbindung reduziert die Proliferation von HUVECs mit einer IC50 von 0,5 μM und verringert die Lumenbildung mit einem IC50-Wert von 50 nM. Es (1 μM) hat keine antiproliferative Wirkung in MX1-Zellen; es hemmt jedoch die Migration um 95%.
In vivo Nirogacestat (PF-03084014), oral in einer Einzeldosis von 200 mg/kg verabreicht, verursacht eine maximale NICD-Hemmung von ~80% in Xenograft-HPB-ALL-Tumoren. Es zeigt in diesem Modus eine robuste Antitumoraktivität mit einer maximalen Tumorwachstumshemmung von ~92% bei einer Dosis von 150 mg/kg, begleitet von einer signifikanten Reduktion der NICD/Notch1-, des Tumormitose-Index (Ki67)- und der apoptosis (aktivierte Caspase-3)-Färbung. Bei 120 mg/kg induziert diese Verbindung apoptosis, Antiproliferation, reduziert die Selbsterneuerungsfähigkeit von Tumorzellen, beeinträchtigt die Tumorgefäßbildung und verringert die Metastasierungsaktivität bei Brustkrebs-HCC1599-Tumor-tragenden Mäusen. Die Behandlung zeigt eine signifikante Antitumoraktivität bei verschiedenen Arten von Brust-Xenograft-Modellen mit einem TGI-Wert von mindestens 50%.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[3]
  • γ-Secretase-Assay

    Ein DNA-Fragment, das die Aminosäuren 596 - 695 der 695-aa-Isoform von APP (APP695) und die Flag-Sequenz (DYKDDDDK) am C-Terminus kodiert, wird durch PCR-Amplifikation mit geeignet entworfenen Oligonukleotiden und der APP695-cDNA erzeugt. Das Met, das als Translationsstartstelle dient, ist das Residuum 596 von APP695 (das P1-Residuum in Bezug auf die β-Secretase-Spaltstelle). Dieses DNA-Fragment wird in den prokaryotischen Expressionsvektor pET2-21b inseriert. Das rekombinante Protein, C100Flag, wird in Escherichia coli [Stamm BL21(DE3)] überproduziert und mittels Mono-Q-Säulenchromatographie gereinigt. C100Flag (1,7 μM) wird mit Zellmembranen (0,5 mg/mL) in Gegenwart von CHAPSO, CHAPS (3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propansulfonat) oder Triton X-100 (0, 0,125, 0,25, 0,5 oder 1%) in Puffer B (50 mM Pipes, pH 7,0; 5 mM MgCl2; 5 mM CaCl2; 150 mM KCl) bei 37°C inkubiert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von RIPA (150 mM NaCl/1,0% NP-40/0,5% Natriumdesoxycholat; 0,1% SDS/50 mM Tris-HCl, pH 8,0) und 5-minütiges Kochen gestoppt. Die Proben werden zentrifugiert und die Überstandslösungen werden auf die Aβ-Peptide mittels ECL analysiert. Die Aβ40- und Aβ42-bezogenen Produkte aus der γ-Secretase-vermittelten Verarbeitung von C100Flag besitzen ein Met am N-Terminus und werden daher als M-Aβ40 bzw. M-Aβ42 definiert. Ebenso wird Überstandslösung (0,125 mg/mL) aus CHAPSO-extrahierten HeLa-Zellmembranen (solubilisierte γ-Secretase) mit C100Flag (1,7 μM) in Puffer B, der 0,25% CHAPSO enthält, inkubiert und anschließend mittels ECL auf M-Aβ40 und M-Aβ42 analysiert. Diese Verbindung, Nirogacestat (PF-03084014), wird im experimentellen Kontext verwendet.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    Human T-ALL cell lines HPB-ALL

  • Konzentrationen

    ~1 μM

  • Inkubationszeit

    7 days

  • Methode

    Cells are seeded in 96-well plates at 10,000 cells/well in growth media supplemented with 10% fetal bovine serum. Serial dilutions of Nirogacestat (PF-03084014) are done in DMSO, appropriate controls or designated concentrations of this compound are added to each well, and cells are incubated at 37℃ for 7 days (final DMSO content 0.1%). Resazurin at a final concentration of 0.1 mg/mL is added to the cells and plates are incubated for 2 to 4 hours. Fluorescent signals are read as emission at 590 nm after excitation at 560 nm.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Human T-cell acute lymphoblastic leukemia xenografts HPB-ALL

  • Dosierungen

    150 mg/kg

  • Verabreichung

    p.o. twice daily

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20530712/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22806875/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

Kundenproduktvalidierung

The expression of p-EGFR and NICD was assessed by western blot after treatment for 3 d.

Daten von [ , , Cell Prolif, 2018, 51(3):e12424 ]

(F) Tumour tissues were further analysed to detect the efficacy of the inhibitors by IHC staining using p-EGFR and Notch1. (4Fa) Notch1 staining was mostly confined on the cell membrane. (4Fc) After Erlotinib treatment, the Notch1 protein was cleaved and translocated to the nucleus. (4Fb) p-EGFR was overexpressed in the control group. (4Fd) Erlotinib treatment inhibited p-EGFR expression. (4Fe-f) PF-03084014 treatment reduced both Notch1 and p-EGFR expression. (4Fg-h) Synthetic therapy reduced the activation of Notch1 and EGFR pathway. Scale bar = 50 μm. *P < .05, **P < .01, ***P < .001

Daten von [ , , Cell Prolif, 2017, doi: 10.1111/cpr.12424 ]

Sellecks Nirogacestat (PF-03084014) Wurde zitiert von 21 Publikationen

Calorie restriction activates a gastric Notch-FOXO1 pathway to expand ghrelin cells [ J Cell Biol, 2024, 223(10)e202305093] PubMed: 38958606
Activation of the γ-secretase/NICD-PXR/Notch pathway induces Taxol resistance in triple-negative breast cancer [ Biochem Pharmacol, 2024, 230(Pt 2):116577] PubMed: 39427919
Multiomic analyses reveal new targets of polycomb repressor complex 2 in Schwann lineage cells and malignant peripheral nerve sheath tumors [ Neurooncol Adv, 2024, 6(1):vdae188] PubMed: 39620202
Inhibition of Notch Signaling Enhances Antitumor Activity of Histone Deacetylase Inhibitor LAQ824 [ Int J Mol Sci, 2023, 24(17)13660] PubMed: 37686467
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
In vitro effects of gamma-secretase inhibition in HPV-positive and HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma [ Invest New Drugs, 2023, 41(2):193-201] PubMed: 36809443
Pharmacological conversion of gut epithelial cells into insulin-producing cells lowers glycemia in diabetic animals [ J Clin Invest, 2022, 132(24)e162720] PubMed: 36282594
DT7 peptide-modified lecithin nanoparticles co-loaded with γ-secretase inhibitor and dexamethasone efficiently inhibit T-cell acute lymphoblastic leukemia and reduce gastrointestinal toxicity [ Cancer Lett, 2022, 533:215608] PubMed: 35240234
BRAFV600E;K601Q metastatic melanoma patient-derived organoids and docking analysis to predict the response to targeted therapy [ Pharmacol Res, 2022, 182:106323] PubMed: 35752358
Chemical induction of gut β-like-cells by combined FoxO1/Notch inhibition as a glucose-lowering treatment for diabetes [ Mol Metab, 2022, 66:101624] PubMed: 36341906

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