NMS-873

Katalog-Nr.S7285 Charge:S728501

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Technische Daten

Formel

C₂₇H₂₈N₄O₃S₂

Molekulargewicht

520.67

CAS-Nr.

1418013-75-8

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (192.06 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

NMS-873 ist ein allosterischer und spezifischer p97-Inhibitor mit einer IC50 von 30 nM, der eine potente Selektivität für VCP/p97 im Vergleich zu einer Reihe anderer AAA-ATPasen, Hsp90 und 53 zusätzlichen analysierten Kinasen (IC50s >10 μM) aufweist.

Ziele

p97
(Cell-free assay)

30 nM

In vitro

NMS-873 reduziert die p97-Empfindlichkeit gegenüber Trypsinverdauung und verhindert den Abbau der Linker-D2-Domäne. Diese Verbindung erzeugt als p97-Inhibitor eine antiproliferative Aktivität in einer Vielzahl hämatologischer und solider Tumorzelllinien. Die Mechanismusstudie zeigt, dass diese Chemikalie die Entfaltungs-Protein-Antwort aktiviert, die Autophagie stört und somit den Tod von Krebszellen induziert.

Merkmale

Der bisher potenteste und spezifischste p97-Inhibitor.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	Biochemische Assay-Entwicklung und HTS Die ATPase-Aktivität und die kinetischen Parameter der rekombinanten Wildtyp-VCP und ihrer Mutanten werden durch Überwachung der ADP-Bildung in der Reaktion unter Verwendung eines modifizierten NADH-gekoppelten Assays bewertet. Da ADP und NADH ATP-kompetitive Inhibitoren der VCP-ATPase-Aktivität sind, wird das Standardprotokoll für den NADH-gekoppelten Assay in ein zweistufiges Verfahren modifiziert. Im ersten Teil recycelt ein ATP-regenerierendes System (40 U/ml Pyruvatkinase und 3 mM Phosphoenolpyruvat) das durch die VCP-Aktivität produzierte ADP, hält die Substratkonzentration konstant (wodurch Produktinhibition verhindert wird) und akkumuliert eine stöchiometrische Menge Pyruvat. Im zweiten Teil wird die VCP-enzymatische Reaktion mit 30 mM EDTA und 250 μM NADH gequencht und stöchiometrisch durch 40 U/ml Laktatdehydrogenase oxidiert, um akkumuliertes Pyruvat zu reduzieren. Der Rückgang der NADH-Konzentration wird bei 340 nm unter Verwendung eines Tecan Safire 2 Reader-Plattens gemessen. Der Assay wird in 96- oder 384-Well-UV-Platten in einem Reaktionspuffer mit 50 mM Hepes, pH 7,5, 0,2 mg/mL BSA, 10 mM MgCl₂ und 2 mM DTT durchgeführt. Experimentelle Daten werden mit einer kooperativen Gleichung gefittet, wobei ein Ks* von etwa 60 μM und ein Hill-Koeffizient (n) von 2,0 ± 0,1 erhalten wird. Die HTS-Kampagne wird gegen eine 1-Millionen-Verbindung-Bibliothek unter Verwendung eines miniaturisierten Assays im 1.536-Well-Format und eines empfindlicheren ADP-Detektionssystems, Transcreener ADP FP, durchgeführt. Eine 20-minütige Vorinkubation von 10 nM VCP und 10 μM Inhibitor wird durchgeführt, wonach 10 μM ATP zur Reaktion hinzugefügt wird, die 90 Minuten lang ablaufen darf, bevor sie gequencht wird. Der durchschnittliche Z' des Screenings beträgt 0,58, und die Trefferquote bei Verwendung von 3× s.d. (38 % Hemmung) als Cutoff beträgt 1,7 %. Primäre Treffer mit >60 % Hemmung bei 10 μM Konzentration werden unter Verwendung physikochemischer und struktureller Filter bereinigt, um 7.516 Verbindungen zu erhalten. Am Ende wird eine Rekonfirmation in Duplikaten an 3.988 primären Treffern durchgeführt, und 500 Verbindungen werden für eine Dosis-Wirkungs-Bewertung unter Verwendung des zuvor beschriebenen NADH-modifizierten gekoppelten Assays ausgewählt. Die Wirksamkeit der interessantesten HTS-Treffer wird sowohl gegen Wildtyp-VCP als auch gegen die C522T-Mutante gemessen. ATP-Konzentrationen, die die halbmaximale Geschwindigkeit (Ks*) für jedes Enzym ergaben, entsprechend 60 μM und 130 μM für den Wildtyp bzw. die C522T-Mutante, werden im Assay verwendet. Um die Abhängigkeit reversibler Inhibitoren von der Substratkonzentration zu untersuchen, wird ihre Wirksamkeit auch bei sättigender ATP-Konzentration (1 mM) bewertet und mit der Wirksamkeit eines Standard-ATP-kompetitiven Inhibitors (AMP-PNP) verglichen.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien A variety of hematological and solid tumor lines Konzentrationen ~10 μM Inkubationszeit 72 hours Methode Cells are seeded at 1,600 cells per well in 384-well white clear-bottom plates. Twenty-four hours after seeding, cells are treated with the compounds (eight dilution points, in duplicate, for each compound) and incubated for an additional 72 h at 37 °C under a 5% CO₂ atmosphere. Cells are then lysed, and the ATP content in each well is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay as a measure of cell viability. IC50 values are calculated using the percentage of growth of treated cells versus the untreated control.

Kinase-Assay:^{^[1]}

Biochemische Assay-Entwicklung und HTS
Die ATPase-Aktivität und die kinetischen Parameter der rekombinanten Wildtyp-VCP und ihrer Mutanten werden durch Überwachung der ADP-Bildung in der Reaktion unter Verwendung eines modifizierten NADH-gekoppelten Assays bewertet. Da ADP und NADH ATP-kompetitive Inhibitoren der VCP-ATPase-Aktivität sind, wird das Standardprotokoll für den NADH-gekoppelten Assay in ein zweistufiges Verfahren modifiziert. Im ersten Teil recycelt ein ATP-regenerierendes System (40 U/ml Pyruvatkinase und 3 mM Phosphoenolpyruvat) das durch die VCP-Aktivität produzierte ADP, hält die Substratkonzentration konstant (wodurch Produktinhibition verhindert wird) und akkumuliert eine stöchiometrische Menge Pyruvat. Im zweiten Teil wird die VCP-enzymatische Reaktion mit 30 mM EDTA und 250 μM NADH gequencht und stöchiometrisch durch 40 U/ml Laktatdehydrogenase oxidiert, um akkumuliertes Pyruvat zu reduzieren. Der Rückgang der NADH-Konzentration wird bei 340 nm unter Verwendung eines Tecan Safire 2 Reader-Plattens gemessen. Der Assay wird in 96- oder 384-Well-UV-Platten in einem Reaktionspuffer mit 50 mM Hepes, pH 7,5, 0,2 mg/mL BSA, 10 mM MgCl₂ und 2 mM DTT durchgeführt. Experimentelle Daten werden mit einer kooperativen Gleichung gefittet, wobei ein Ks* von etwa 60 μM und ein Hill-Koeffizient (n) von 2,0 ± 0,1 erhalten wird. Die HTS-Kampagne wird gegen eine 1-Millionen-Verbindung-Bibliothek unter Verwendung eines miniaturisierten Assays im 1.536-Well-Format und eines empfindlicheren ADP-Detektionssystems, Transcreener ADP FP, durchgeführt. Eine 20-minütige Vorinkubation von 10 nM VCP und 10 μM Inhibitor wird durchgeführt, wonach 10 μM ATP zur Reaktion hinzugefügt wird, die 90 Minuten lang ablaufen darf, bevor sie gequencht wird. Der durchschnittliche Z' des Screenings beträgt 0,58, und die Trefferquote bei Verwendung von 3× s.d. (38 % Hemmung) als Cutoff beträgt 1,7 %. Primäre Treffer mit >60 % Hemmung bei 10 μM Konzentration werden unter Verwendung physikochemischer und struktureller Filter bereinigt, um 7.516 Verbindungen zu erhalten. Am Ende wird eine Rekonfirmation in Duplikaten an 3.988 primären Treffern durchgeführt, und 500 Verbindungen werden für eine Dosis-Wirkungs-Bewertung unter Verwendung des zuvor beschriebenen NADH-modifizierten gekoppelten Assays ausgewählt. Die Wirksamkeit der interessantesten HTS-Treffer wird sowohl gegen Wildtyp-VCP als auch gegen die C522T-Mutante gemessen. ATP-Konzentrationen, die die halbmaximale Geschwindigkeit (Ks*) für jedes Enzym ergaben, entsprechend 60 μM und 130 μM für den Wildtyp bzw. die C522T-Mutante, werden im Assay verwendet. Um die Abhängigkeit reversibler Inhibitoren von der Substratkonzentration zu untersuchen, wird ihre Wirksamkeit auch bei sättigender ATP-Konzentration (1 mM) bewertet und mit der Wirksamkeit eines Standard-ATP-kompetitiven Inhibitors (AMP-PNP) verglichen.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
A variety of hematological and solid tumor lines
Konzentrationen
~10 μM
Inkubationszeit
72 hours
Methode
Cells are seeded at 1,600 cells per well in 384-well white clear-bottom plates. Twenty-four hours after seeding, cells are treated with the compounds (eight dilution points, in duplicate, for each compound) and incubated for an additional 72 h at 37 °C under a 5% CO₂ atmosphere. Cells are then lysed, and the ATP content in each well is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay as a measure of cell viability. IC50 values are calculated using the percentage of growth of treated cells versus the untreated control.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23892893/

Kundenproduktvalidierung

: , , Toxicol Appl Pharmacol, 2016, 305:267-73.

Sellecks NMS-873 Wurde zitiert von 53 Publikationen

Targeting site-specific N-glycosylated B7H3 induces potent antitumor immunity [ Nat Commun, 2025, 16(1):3546]	PubMed: 40229277
Curcumin Induces Homologous Recombination Deficiency by BRCA2 Degradation in Breast Cancer and Normal Cells [ Cancers (Basel), 2025, 17(13)2109]	PubMed: 40647408
Co-opting templated aggregation to degrade pathogenic tau assemblies and improve motor function [ Cell, 2024, 187(21):5967-5980.e17]	PubMed: 39276772
The Fanconi anemia pathway induces chromothripsis and ecDNA-driven cancer drug resistance [ Cell, 2024, 187(21):6055-6070.e22]	PubMed: 39181133
Transcription-coupled DNA-protein crosslink repair by CSB and CRL4CSA-mediated degradation [ Nat Cell Biol, 2024, 10.1038/s41556-024-01394-y]	PubMed: 38600236
Reactive oxygen species control protein degradation at the mitochondrial import gate [ Mol Cell, 2024, 84(23):4612-4628.e13]	PubMed: 39642856
Sugar-mediated non-canonical ubiquitination impairs Nrf1/NFE2L1 activation [ Mol Cell, 2024, 84(16):3115-3127.e11]	PubMed: 39116872
Differential processing of RNA polymerase II at DNA damage correlates with transcription-coupled repair syndrome severity [ Nucleic Acids Res, 2024, gkae618]	PubMed: 39021334
The protein segregase VCP/p97 promotes host antifungal defense via regulation of SYK activation [ PLoS Pathog, 2024, 20(10):e1012674]	PubMed: 39471181
Inhibition of proteolytic and ATPase activities of the proteasome by the BTK inhibitor CGI-1746 [ iScience, 2024, 27(11):110961]	PubMed: 39759071

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