NSC 23766 Trihydrochloride

NSC23766 passt in eine Oberflächenfurche von Rac1, die als entscheidend für die GEF-Spezifikation bekannt ist. NSC23766 hemmt effektiv die Rac1-Bindung und -Aktivierung durch die Rac-spezifischen GEFs Trio oder Tiam1 dosisabhängig, ohne die eng verwandte Cdc42- oder RhoA-Bindung oder -Aktivierung durch ihre jeweiligen GEFs oder die Rac1-Interaktion mit BcrGAP oder dem Effektor PAK1 zu beeinträchtigen. [1]

NSC 23766 ist aktiv bei der Regulierung von Rac GTPase-Funktionen am Zytoskelett und vielen Zellfunktionen, einschließlich Cell Cycle, Zellwachstum, Adhäsion, Migration und Gentranskription. NSC 23766 (50 μM) blockiert potent Serum- oder Plättchen-Wachstumsfaktor-induzierte Rac1-Aktivierung und Lamellipodienbildung, ohne die Aktivität von endogenem Cdc42 oder RhoA in NIH 3T3-Zellen zu beeinflussen. NSC 23766 reduziert Trio- oder Tiam1-, aber nicht Vav-, Lbc-, Intersectin- oder konstitutiv aktive Rac1-Mutanten-stimuliertes NIH 3T3-Zellwachstum und unterdrückt Trio-, Tiam1- oder Ras-induzierte Zelltransformation. NSC23766 hemmt dosisabhängig die Proliferation von PC-3-Zellen und das Verankerungs-unabhängige Wachstum. 25 μM NSC23766 hemmt die Invasion von PC-3-Zellen durch Matrigel um 85 %. [1] 50 μM NSC 23766 hemmt die Thrombin-induzierte Aktivierung von Rac1 und Rac2 in menschlichen Blutplättchen sowie die Plättchenaggregation. [2]

NSC23766 verhindert die Aβ40- und Aβ42-Produktion in swAPP-HEK293-Zellen, ohne Notch und sAPPα zu beeinflussen. NSC23766 verhindert die γ-Sekretase-Aktivität in Zellen, wirkt aber nicht als direkter γ-Sekretase-Inhibitor. NSC23766 reduziert dosisabhängig die Spiegel von sezerniertem und intrazellulärem Aβ40 mit einer IC50 von 48,94 μM. 50 μM NSC 23766 hemmt die Freisetzung von Aβ42 um 57,97 %. [3]

NSC23766 reguliert die Expression der endothelialen Stickstoffmonoxid-Synthase und die endotheliale Funktion. 100 μM NSC23766 unterdrückt die eNOS-Promoteraktivität um 60 % in bovinen Aorten-ECs und um 30 % bis 35 % in bEND.3-Zellen. Die Hemmung von Rac1 mit NSC23766 destabilisiert die eNOS-mRNA und verkürzt ihre Halbwertszeit auf 17 Stunden. NSC23766 schwächt dosisabhängig die ACh-induzierte Relaxation von Aortenringen von Wildtyp-Mäusen ab. [4]

NSC23766 hemmt das Zellwachstum und induziert Apoptose. NSC23766 verringert die Lebensfähigkeit von MDA-MB-468- und MDA-MB-231-Zellen dosisabhängig mit einer IC50 von ~10 μM, was nicht mit dem Status von Östrogenrezeptor (ER), Progesteronrezeptor (PR), Her2 und p53-Mutation korreliert ist. NSC23766 hat wenig Einfluss auf das Überleben der normalen Brustepithelzellen MCF12A. Nach 24-stündiger Exposition gegenüber NSC 23766 zeigen MDA-MB-231-Zellen einen Anstieg von 41 % auf 65 % in der G1-Phase und eine gleichzeitige Abnahme in der S- und G2-M-Phase. 100 μM NSC23766 induziert einen sechsfacher Anstieg der apoptotischen MDA-MB-468. Die Hemmung von NSC23766 auf den Cell Cycle-Arrest oder die Apoptose in Brustkrebszellen wird durch die Herunterregulierung von Cyclin D1, Survivin und X-chromosomal-gebundenem Inhibitor der Proteinapoptose vermittelt. [5]

NSC23766 induziert die Mobilisierung hämatopoetischer Stammzellen/Vorläuferzellen. Die intraperitoneale Verabreichung von NSC23766 (2,5 mg/kg) an den „schlecht mobilisierenden“ C57Bl/6-Mausstamm führt zu einer zweifachen Zunahme zirkulierender hämatopoetischer Stammzellen/Vorläuferzellen 6 Stunden nach der Injektion. [2]

NSC23766 lindert Lipopolysaccharid-induzierte akute Lungenverletzungen bei Mäusen. Die Behandlung mit NSC23766 bei 1 oder 3 mg/kg reduziert nicht nur die Infiltration entzündlicher Zellen und MPO-Aktivitäten, sondern hemmt auch die mRNA-Expression proinflammatorischer Mediatoren, Tumornekrosefaktor-α und Interleukin-1β. NSC23766 reduziert auch die Akkumulation von Evans Blue und Albumin in LPS-belasteten Lungen. [6]

• Rho GTPase-Aktivitätstest

  Zellen werden in der logarithmischen Phase in einer 10-cm-Schale gezüchtet und in einem Medium mit 0,5 % Serum oder wie anders angegeben 24 Stunden lang vor der Lyse in einem Puffer, der 20 mM Tris HCl (pH 7,6), 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 % Nonidet P-40, 10 % Glycerin und eine 1× Proteaseinhibitor-Mischung enthält, ausgehungert. Lysate werden geklärt, die Proteinkonzentrationen werden normalisiert, und das GTP-gebundene Rac1 in den Lysaten wird durch einen Effektor-Domänen-Pull-down-Assay gemessen. Für den His6-PAK1 PBD Pull-down-Assay werden Zelllysate 30 Minuten lang mit Ni2+-Agarose-immobilisiertem His6-PAK1 PBD-Domäne (~1 μg jeweils), gereinigt aus E. coli, inkubiert. Die Ni2+-Agarose-Co-Präzipitate werden zweimal im Waschpuffer gewaschen und mittels Immunoblotting mit einem Anti-Rac1-monoklonalen Antikörper analysiert.

• Zelllinien

  Human breast cancer cells MDA-MB-468

• Konzentrationen

  0-100 μM

• Inkubationszeit

  2 days

• Methode

  Cells (1.5 × 10⁴/mL) are seeded in each well of 96-well tissue culture plates with 200 μL of medium. After 24 hours of plating, the medium is replaced with 200 μL of fresh medium containing NSC23766 at the indicated concentrations. At the end of the treatment period 20 μL of MTS solution are added to each well and incubated at 37 ℃ for 2 hours. Absorbance at 490 nm is read on a 96-well plate reader.

• Tiermodelle

  Male ICR mic

• Dosierungen

  1 or 3 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.