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Biologische Beschreibung
| Spezifität | Nurr1 Antibody [L9M11] detektiert endogene Spiegel des gesamten Nurr1-Proteins. |
|---|---|
| Hintergrund | Nurr1 (NR4A2), ein verwaister nukleärer Rezeptor-Transkriptionsfaktor, der für die Spezifikation, das Überleben und die Aufrechterhaltung dopaminerger Neuronen im Mittelhirn unerlässlich ist, weist eine modulare Architektur auf, die eine N-terminale A/B-Transaktivierungsdomäne (AF-1) mit Phosphorylierungsstellen (Ser336 durch ERK), eine zentrale DNA-Bindungsdomäne (DBD) mit zwei Zinkfinger-Motiven, die NGFI-B-Response-Elemente (NBRE: AAAGGTCA) als Monomere oder IR0-Halbseiten in RXR-Heterodimeren erkennen, eine flexible Scharnierregion, die die Korekrutierung erleichtert, und eine C-terminale Ligandenbindungsdomäne (LBD) umfasst, die keine konventionelle hydrophobe Tasche besitzt, aber eine geladene helikale Furche auf H11/H12 für das Andocken von Koregulatoren über hydrophobe Patches freilegt. Durch AF-1/2-Synergie konstitutiv aktiv, treibt Nurr1 dopaminerge Genprogramme (Tyrosinhydroxylase, VMAT2, DAT, Pitx3) durch Chromatin-Looping und CBP/p300-Koaktivierung plus RXRα-Heterodimerisierung an, die die Transkription an kombinierten NBRE-DR5-Elementen verstärkt, während posttranslationale Modifikationen, ERK-Phosphorylierung, die AF-1 verstärkt, SUMOylierung an K185, die über CtBP unterdrückt, GSK3β-Phosphorylierung, die die RXR-Interaktion stört, die Aktivität während der Entwicklung und Stressreaktionen feinabstimmen, gekoppelt an Wnt/β-Catenin für die Proliferation von Vorläuferzellen und BDNF/TrkB für den Neuroschutz. Heterozygote Mutationen (R502X) verursachen hereditären Parkinsonismus mit reduzierten TH+-Neuronen, während ein altersbedingter Rückgang den DA-Verlust bei sporadischer PD verschlimmert, wodurch Nurr1 eine Schlüsselrolle einnimmt. |
Nutzungsinformationen
| Anwendung | IHC | Verdünnung |
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| Reaktivität | Rat | ||||
| Quelle | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||
| Lagerpuffer | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Lagerung (Ab dem Datum des Erhalts) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Referenzen
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