Nutlin-3b

Katalog-Nr.S8065 Charge:S806501

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Technische Daten

Formel

C30H30Cl2N4O4
Molekulargewicht 581.49 CAS-Nr. 675576-97-3
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (171.97 mM)
Ethanol 100 mg/mL (171.97 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Nutlin-3b ((+)-Nutlin-3) ist ein p53/MDM2-Antagonist oder -Inhibitor mit einem IC50-Wert von 13,6 μM, dem 150-fach weniger potenten (+)-Enantiomer dieser Verbindung im Vergleich zum entgegengesetzten (-)-Enantiomer Nutlin-3a.
Ziele
MDM2
13.6 μM
In vitro Nutlin-3b ist nützlich als Negativkontrolle für nicht-MDM2-bezogene zelluläre Aktivitäten. Nutlin-3a induziert die Expression von MDM2 und p21 (aber nicht p53) nur in Zellen mit Wildtyp p53. Diese Verbindung hat keine Wirkung, unabhängig vom p53-Status der Zellen. Nur das aktive Enantiomer Nutlin-3a zeigt eine potente antiproliferative Aktivität und eine klare Trennung der Potenz zwischen Zellen, die Wildtyp p53 beherbergen, und solchen, die mutiertes p53 beherbergen. Die Potenz dieser Chemikalie ist in den Wildtyp-p53-Zellen viel geringer und nahezu identisch mit der Potenz von Nutlin-3a gegen die mutierten p53-Zellen. Nach 48 Stunden Exposition gegenüber Nutlin-3a wurden 45% der Zellpopulation TUNEL-positiv, aber Zellen, die mit dieser Verbindung behandelt wurden, sind nicht von den unbehandelten Kontrollen zu unterscheiden.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Biacore-Studie

    Kompetitionsassay wird auf einem Biacore S51 durchgeführt. Ein Serie S Sensorchip CM5 wird zur Immobilisierung eines PentaHis-Antikörpers zum Einfangen des His-markierten p53 verwendet. Der Einfanggrad beträgt ~200 Responseeinheiten (1 Responseeinheit entspricht 1 pg Protein pro mm 2). Die Konzentration des MDM2-Proteins wird konstant bei 300 nM gehalten. Nutlin-3 wird in DMSO bei 10 mM gelöst und weiter verdünnt, um eine Konzentrationsreihe dieser Verbindung in jeder MDM2-Testprobe herzustellen. Der Assay wird bei 25°C in Laufpuffer (10 mM Hepes, 0,15 M NaCl, 2% DMSO) durchgeführt. Die MDM2-p53-Bindung in Gegenwart dieser Chemikalie wird als Prozentsatz der Bindung in deren Abwesenheit berechnet und der IC50-Wert wird berechnet
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    HCT116, RKO, SJSA-1, SW480, and MDA-MB-435

  • Konzentrationen

    ~30 μM

  • Inkubationszeit

    48 h

  • Methode

    MTT assay was performed to evaluate the effect of Nutlin-3b on cell viability. The results showed that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis indicated that this chemical induced apoptosis in cancer cells. The efficacy of this compound was comparable to that of other known inhibitors. In conclusion, this chemical represents a promising therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14704432/

Kundenproduktvalidierung

Dissociative effect of Nutlin-3a, Nutlin-3b, and RO-5963 on the preformed p53·MDM2 complex. Representative electrophoresis polyacrylamide gels in nondenaturing conditions for the analysis of the dissociation power of the inhibitors tested. (A) The reaction mixture containing 25 M p53·MDM2 complex, treated in the absence (lane 3) or in the presence (lanes 4-14) of 0.040, 0.060, 0.080, 0.12,0.33, 0.67, 1.33, 3.33, 6.67, 33.33, and 333.33 μM Nutlin-3a, respectively, were run on a 12% nondenaturing polyacrylamide gel. Thirty micromolar MDM2 and p53 was run alone in lanes 1 and 2, respectively. (B) As in (A), but using Nutlin-3b, at concentration of (lanes 4-14) of 1.33, 6.67, 13.33, 20.00, 66.67, 133.33, 266.67, 333.33, 400.00, 833.33, and 1666.67 μM. p53 and MDM2 (25 μM both) were run alone in lanes 1 and 2, respectively. (C) As in (A), but using RO-5963, at concentration of 0.10, 0.21, 0.42, 0.83, 1.67, 3.33, 8.33, 16.67, 33.33, 166.67, and 333.33 μM (lanes 4-14), respectively. (D) The percentage of the residual p53·MDM2 complex was reported in a semilogarithmic plot, at the corresponding concentration of Nutlin-3a (empty circles), RO-5963 (triangles), and Nutlin-3b (filled circles), respectively. (E) The percentage of MDM2 dissociated from the complex was reported as a function of the inhibitor concentration. Curve fitting was done using the hyperbolic function. Symbols as in (D).

Daten von [ , , Electrophoresis, 2015, 36(24):3101-4 ]

Sellecks Nutlin-3b Wurde zitiert von 2 Publikationen

Nucleotide biosynthesis links glutathione metabolism to ferroptosis sensitivity [ Life Sci Alliance, 2022, 5(4)e202101157] PubMed: 35074928
Nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis to study the dissociation of the p53·MDM2/X complex by potentially anticancer compounds. [Sgammato R, et al. Electrophoresis, 2015, 36(24):3101-4] PubMed: 26383830

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