In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
NVP-BVU972 ist ein selektiver und potenter Met (c-Met)-Inhibitor mit einer IC50 von 14 nM.
Ziele
Met
14 nM
In vitro
NVP-BVU972 hemmt die MET-Kinase potent, zeigt aber eine geringe Hemmung gegenüber anderen Kinasen, einschließlich der eng verwandten Kinase RON, mit IC50-Werten von mehr als 1000 nM. Diese Verbindung unterdrückt auch die konstitutive MET-Phosphorylierung in GTL-16-Zellen oder die HGF-stimulierte MET-Phosphorylierung in A549-Zellen mit IC50-Werten von 7,3 nM bzw. 22 nM. Es verhindert potent das Wachstum der MET-Gen-amplifizierten Zelllinien GTL-16, MKN-45 und EBC-1 mit IC50-Werten von 66 nM, 82 nM bzw. 32 nM. Im Einklang mit ihrer hohen Frequenz in diesem Verbindungsscreen führen die Y1230- und D1228-Mutationen zu dramatischen Verschiebungen der gemessenen IC50-Werte dafür in der BaF3-Zelllinie. Die durch V1155L ausgelöste Resistenz ist auf diese Chemikalie begrenzter. Eine dosisabhängige Reduktion der TPR-MET-Phosphorylierung bei Anwendung auf BaF3-Zellen, die Wildtyp-TPR-MET exprimieren. Sowohl Y1230H- als auch D1228A-Mutationen hoben die Wirkung dieser Verbindung, aber nicht die von AMG 458, auf. F1200I und L1195V stören jedoch die Potenz davon, die TPR-MET-Phosphorylierung zu verhindern.
TR-FRET biochemischer Assay mit MET Wildtyp und Mutanten
Die Enzymaktivität wird in einem zeitaufgelösten Fluoreszenzresonanzenergietransfer (TR-FRET) -Assay gemessen, wobei die Tyrosinphosphorylierung mit einem Eu-markierten Anti-Phospho-Tyrosin-Antikörper (Fluoreszenzdonor) und an Streptavidin konjugiertem Allophycocyanin (Fluoreszenzakzeptor) nachgewiesen wird, das an ein Biotin auf dem Substratpeptid bindet. Für jede Variante werden Km-Konzentrationen für ATP in Abwesenheit dieser Verbindung bestimmt, und die ATP-Konzentration in der Kinase-Reaktion wird auf Km eingestellt (4 μM für MET wt, 1 μM für MET Y1230H und MET F1200I). Es wird in DMSO gelöst und verdünnt und in vierfacher Ausführung getestet. Kinase-Reaktionen werden in 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 8 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 0,05 % Tween 20, 0,05 % Rinderserumalbumin, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 mM Na3VO4 in weißen 1536-Well-Platten bei Raumtemperatur durchgeführt. Diese Chemikalie und das Enzym werden 20 Minuten lang in einem Volumen von 2 μL inkubiert, gefolgt von der Zugabe von 1 μL ATP und 1 μL biotinyliertem Peptidsubstrat (PTK1) zu Endkonzentrationen von Km bzw. 1 μM. Die Enzymkonzentrationen in den Reaktionen betragen 5 nM für MET wt und 4 nM für die F1200I- und Y1230H-Varianten. Nach 90 Minuten werden die Reaktionen durch Zugabe von 1 μL Stopp-/Detektionslösung gestoppt, um Endkonzentrationen von 10 mM EDTA, 3,5 nM Eu-markiertem Anti-Phospho-Tyrosin-Antikörper PY20 und 10 nM Streptavidin-Allophycocyanin zu erreichen. Der zeitaufgelöste Fluoreszenzresonanzenergietransfer wird in einem Envision-Plattenlesegerät gemessen (Anregung 320 nm, Emission 615 nm und 665 nm).
BaF3 cells containing TPR-MET or various mutants thereof are grown in RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum. For maintenance of parental BaF3 cells the medium is additionally supplemented with 10 ng/mL interleukin-3 (IL-3). For proliferation assays, BaF3 cells are seeded on 96-well-plates in triplicates at 104 cells per well and incubated with various concentrations of this compound for 72 hours followed by quantification of viable cells using a resazurin sodium salt dye reduction readout. IC50 values are determined with the XLFit Excel Add-In using a 4-parameter dose response model.
Referenzen
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21697284/
Sellecks NVP-BVU972 Wurde zitiert von 1 Publikation
A chemical screen for modulators of mRNA translation identifies a distinct mechanism of toxicity for sphingosine kinase inhibitors
[ PLoS Biol, 2021, 19(5):e3001263]
RÜCKGABERICHTLINIE
Die bedingungslose Rückgaberichtlinie von Selleck Chemical gewährleistet unseren Kunden ein reibungsloses Online-Einkaufserlebnis. Wenn Sie in irgendeiner Weise mit Ihrem Kauf unzufrieden sind, können Sie jeden Artikel innerhalb von 7 Tagen nach Erhalt zurückgeben. Im Falle von Produktqualitätsproblemen, sei es protokollbezogene oder produktbezogene Probleme, können Sie jeden Artikel innerhalb von 365 Tagen ab dem ursprünglichen Kaufdatum zurückgeben. Bitte befolgen Sie die nachstehenden Anweisungen, wenn Sie Produkte zurücksenden.
VERSAND UND LAGERUNG
Selleck-Produkte werden bei Raumtemperatur transportiert. Wenn Sie das Produkt bei Raumtemperatur erhalten, seien Sie versichert, dass die Qualitätskontrollabteilung von Selleck Experimente durchgeführt hat, um zu überprüfen, dass die normale Temperaturplatzierung von einem Monat die biologische Aktivität von Pulverprodukten nicht beeinträchtigt. Nach dem Sammeln lagern Sie das Produkt bitte gemäß den in der Datenblatt beschriebenen Anforderungen. Die meisten Selleck-Produkte sind unter den empfohlenen Bedingungen stabil.
NICHT FÜR DIE ANWENDUNG AM MENSCHEN, FÜR VETERINÄRMEDIZINISCHE DIAGNOSTIK ODER THERAPEUTISCHE ZWECKE.
