AZD2281 (Olaparib)

Olaparib (AZD2281) wirkt gegen BRCA1- oder BRCA2-Mutationen und ist nicht empfindlich gegenüber Tankyrase-1 (IC50 >1 μM). Es könnte die PARP-1-Aktivität in Konzentrationen von 30-100 nM in SW620-Zellen aufheben. Diese Verbindung ist hypersensitiv gegenüber BRCA1-defizienten Zelllinien (MDA-MB-463 und HCC1937) im Vergleich zu BRCA1- und BRCA2-profizienten Zelllinien (Hs578T, MDA-MB-231 und T47D). [1] Es ist stark empfindlich gegenüber KB2P-Zellen aufgrund der Unterdrückung der Basenexzisionsreparatur durch PARP-Inhibition, was zur Umwandlung von Einzelstrangbrüchen in Doppelstrangbrüche während der DNA-Replikation führen und somit BRCA2-abhängige Rekombinationswege aktivieren kann. [2]

Olaparib (AZD2281) (10 mg/kg, p.o.) in Kombination unterdrückt das Tumorwachstum in SW620-Xenografts signifikant. [1] Es zeigt eine gute Reaktion auf Brca1^-/-;p53^-/- Mammatumoren (50 mg/kg i.p. pro Tag), während es keine Reaktionen auf HR-defiziente Ecad^-/-;p53^-/- Mammatumoren zeigt. Diese Verbindung zeigt sogar keine dosislimitierende Toxizität bei tumortragenden Mäusen. [3] Es wurde zur Behandlung von BRCA-mutierten Tumoren wie Eierstock-, Brust- und Prostatakrebs eingesetzt. Darüber hinaus zeigt es eine selektive Hemmung von ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated)-defizienten Tumorzellen, was darauf hindeutet, dass es ein potenzielles Mittel zur Behandlung von ATM-mutierten lymphoiden Tumoren sein könnte. [4]

• FlashPlate-Assay (96-Well-Screening-Assay)

  In die Spalten 1 bis 10 werden 1 μL Olaparib (AZD2281) (in DMSO) gegeben, und 1 μL reines DMSO wird in die Positiv- (POS) und Negativ-Kontrollvertiefungen (NEG) (Spalten 11 bzw. 12) einer vorbehandelten FlashPlate gegeben. PARP-1 wird 1:40 in Puffer (Puffer B: 10 % Glycerin (v/v), 25 mM HEPES, 12,5 mM MgCl₂, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0,01 % NP-40 (v/v), pH 7,6) verdünnt und 40 μL zu allen 96 Vertiefungen gegeben (endgültige PARP-1-Konzentration im Assay beträgt ~1 ng/μL). Die Platte wird versiegelt und 15 Minuten bei RT geschüttelt. Anschließend werden 10 μL einer positiven Reaktionsmischung (0,2 ng/μL doppelsträngige Oligonukleotid [M3/M4] DNA pro Vertiefung, 5 μM NAD⁺ Endassaykonzentration und 0,075 μCi ³H-NAD⁺ pro Vertiefung) zu den entsprechenden Vertiefungen (Spalten 1-11) gegeben. Die negative Reaktionsmischung, der das DNA-Oligonukleotid fehlt, wird zu Spalte 12 gegeben (wobei der mittlere negative Kontrollwert als Hintergrund verwendet wird). Die Platte wird erneut versiegelt und weitere 60 Minuten bei RT geschüttelt, um die Reaktion fortzusetzen. Dann werden 50 μL eiskalte Essigsäure (30 %) zu jeder Vertiefung gegeben, um die Reaktion zu stoppen, und die Platte wird versiegelt und weitere 60 Minuten bei RT geschüttelt. Das an die FlashPlate gebundene tritiierte Signal wird dann in Counts per Minute (CPM) mit dem TopCount-Plattenleser bestimmt.

• Zelllinien

  Breast cancer cell lines including SW620 colon, A2780 ovarian, HCC1937, Hs578T, MDA-MB-231, MDA-MB-436, and T47D

• Konzentrationen

  1-300 nM

• Inkubationszeit

  7-14 days

• Methode

  The cytotoxicity of Olaparib (AZD2281) is measured by clonogenic assay. It is dissolved in DMSO and diluted by culture media before use. The cells are seeded in six well plates and left to attach overnight. Then this compound is added at various concentrations and the cells are incubated for 7-14 days. After that the surviving colonies are counted for calculating the IC50.

• Tiermodelle

  Brca1^-/-;p53^-/- mammary tumors are generated in K14cre;Brca1^F/F;p53^F/F mice.

• Dosierungen

  50 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.p. injection at 10 μL/g of body weight