Ozanimod

In S1P1R-HEK293T-Zellen induziert Ozanimod eine anhaltende S1P1R-Internalisierung und -Degradation. [1]

In vivo zeigt Ozanimod eine hohe orale Bioverfügbarkeit und ein hohes Verteilungsvolumen. In einem MOG-induzierten EAE-Mausmodell unterdrückt diese Verbindung (3 mg/kg, p.o.) klinische Symptome. In einem Ratten-TNBS-Modell für entzündliche Darmerkrankungen hemmt sie (1,2 mg/kg, p.o.) klinische und histologische Krankheitswerte. In einem naiven CD4+CD45Rbhi T-Zell-Adoptivtransfermodell reduzierte diese Chemikalie (1,2 mg/kg, p.o.) auch die Krankheitschwere signifikant, beurteilt durch Messung des Entzündungsgrades, des Drüsenverlusts, der Hyperplasie, des Neutrophileninfiltrats und der Schleimhautdicke. [1]

• In-vitro-Pharmakologie-Assays

  Zellsignalisierungs-Assays verwendeten den LiveBLAzer-FRET B/G-Assay, um cAMP (S1P1R) oder β-Arrestin-Signalisierung (S1P4R) nachzuweisen. Die Assays werden in 384-Well-Platten in dreifacher Ausführung gemäß den Herstelleranweisungen durchgeführt. Verbindungslösungen werden bei 10 mM in 100 % DMSO bei -80 °C gelagert und anfänglich 1:10 mit 20 % (2-Hydroxypropyl)-β-Cyclodextrin verdünnt. Eine 10-Punkt-Dosis-Wirkungs-Kurve wird bei 40-facher Endassaykonzentration in 10 mM Hepes pH 7,4, enthaltend 0,1 % Pluronic F-127, erstellt. Für den S1P1R-Assay werden 80 μM Forskolin in das Verdünnungsmittel gegeben. Kurz gesagt, 10⁴ Zellen/Well werden 4 Stunden lang bei 37 °C mit einer Dosis-Wirkungs-Reihe des Liganden inkubiert. CC4-AM-Substrat und Probenecid werden zugegeben und 2 weitere Stunden bei 37 °C inkubiert und mit einem SpectramaxM5 analysiert. Für S1P1R-cAMP-Assays werden die Daten auf die maximale Fluoreszenz, die durch 2 μM Forskolin erzeugt wird, normalisiert. Für GTPγS-Bindungsassays werden 1-5 μg/Well Membranprotein mit 10 μM GDP, 100-500 μg/Well Wheat Germ Agglutinin PVT SPA-Beads in 50 mM HEPES, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 20 μg/ml Saponin und 0,1 % fettsäurefreiem BSA für 15 Minuten in 96-Well-Platten inkubiert. Nach Zugabe der Verbindung und 200 pM GTP [35S] (1250 Ci/mmol) werden die Platten 120 Minuten lang inkubiert und bei 300 g für 5 Minuten zentrifugiert. Die Radioaktivität wird mit einem TopCount-Instrument nachgewiesen. Alle Daten werden mit einer nichtlinearen Regression mit variabler Steigung (GraphPad Prism) an ein Vier-Parameter-Modell angepasst, um die halbmaximale effektive Konzentration (EC50) und die maximale Wirksamkeit relativ zu S1P zu erzeugen.

• Zelllinien

  HEK293T cells

• Konzentrationen

  1 μM

• Inkubationszeit

  1 h

• Methode

  Cells expressing S1P1 receptors were incubated with vehicle control or 1 μM this compound for 1 h.

• Tiermodelle

  MOG-induced EAE model in C57Bl6 mice, TNBS model of inflammatory bowel disease in male Sprague Dawley rats, and Na飗e CD4+CD45Rbhi T cell adoptive transfer model in SCID mice

• Dosierungen

  0.1-3 mg/kg

• Verabreichung

  p.o.