P22077

P22077 ist ein Analogon des kürzlich entdeckten USP7-Inhibitors P5091. Diese Verbindung hat über den getesteten Konzentrationsbereich hinweg eine vernachlässigbare Aktivität gegenüber DEN1 und SENP2core, hemmt aber USP7 mit einer IC50 von 8 μM. [1]

Die In-vitro-Inhibitoraktivitäten dieser Chemikalie gegen eine Reihe von DUBs, Cysteinproteasen und anderen Familien proteolytischer Enzyme zeigen, dass sie USP7 und die eng verwandte DUB USP47 hemmt. Sie hemmt eine kleinere Untergruppe von DUBs in einer Konzentration von 15–45 mM in Zelllysaten. Diese Verbindung induziert den (Tumor-)Zelltod mit EC50-Werten im niedrigen mikromolaren Bereich. Ihre Hemmung zeigte Veränderungen in den ubiquitinierten Proteinspiegeln, die sich von denen des breit wirkenden Inhibitors unterscheiden. Darüber hinaus legen quantitative MS nahe, dass die E3 Ubiquitin-Ligase-Komponenten RBX1, DCAF7, DCAF11 und das DNA-Schaden-bindende Protein 1 (DDB1) nach zellulärer Behandlung mit dieser Chemikalie reduziert sind. [2]

Die Hemmung von USP7 durch P22077 hemmt auch das Wachstum von Melanomtumoren in vivo.

• UbL-EKL-Assays

  Sofern nicht anders angegeben, wird rekombinante Isopeptidase mit UbL-EKL und EKLsubstrate I zu Endkonzentrationen von 20, 50 bzw. 20 nM in einem Gesamtvolumen von 100 μL in einem Well einer schwarzwandigen 96-Well-Platte gemischt. Alle Verdünnungen werden in Isopeptidase-Assaypuffer (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM CaCl₂ und 2 mM β-Mercaptoethanol) durchgeführt. Die Zunahme der Fluoreszenzintensität über die Zeit wird an einem Perkin Elmer Envision Fluoreszenzplattenleser mit Anregungs- und Emissionsfiltern bestimmt, die dem verwendeten Fluoreszenzresonanzenergietransfer-Peptid entsprechen. Sofern nicht anders angegeben, werden die Netto-Relativen-Fluoreszenz-Einheiten (RFUs) durch Subtrahieren des Leerwert-RFU-Wertes (20 nM EKL substrate I oder 100 nM EKL substrate II in Isopeptidase-Assaypuffer) von jedem Datenpunkt bestimmt. SENP2core, SUMO3-EKL-Empfindlichkeitsexperimente werden durchgeführt, indem 0–100 fM SENP2core mit 50 nM SUMO3-EKL und 100 nM EKL substrate I in einem Gesamtvolumen von 100 μL wie oben gemischt werden.

• Tiermodelle

  Female SD nude mice

• Dosierungen

  10 mg/kg

• Verabreichung

  i.v.