PACAP 1-38

PACAP 1-38 hat potente, wirksame und anhaltende stimulierende Effekte auf die sympathische neuronale NPY- und Katecholaminproduktion[1]. Es ist ein pleiotropes Neuropeptid, das eine Vielzahl biologischer Wirkungen aufweist, einschließlich Aktivitäten als Neurotransmitter, Neuromodulator, neurotropher Faktor sowie als Immunmodulator in Immunzellen durch seine Wirkung auf die MAPK-Signalgebung und die Modulation der Aktivierung von NFκB. Diese Verbindung verhindert dramatisch die Schädigung von kultivierten renalen proximalen Tubuluszellen, die durch Myelom-Leichtketten verursacht wird, durch die Unterdrückung der Produktion von proinflammatorischen Zytokinen, indem sie p38 MAPK und die Translokation von NFκB über sowohl PAC1- als auch VPAC1-Rezeptoren hemmt. Es hemmt das Myelomzellwachstum direkt und möglicherweise auch indirekt, indem es die Produktion des Wachstumsfaktors IL-6 aus Knochenmarkstromazellen unterdrückt, die durch die Adhäsion von Myelomzellen stimuliert wird. Dieses Neuropeptid unterdrückte die Freisetzung von IL-6 und TNFα dosisabhängig[2].

PACAP38 ist in der Lage, die durch Leichtketten induzierte Zytokinexpression mit großer Potenz zu hemmen und verhinderte die resultierende Zellschädigung in vivo. Diese Verbindung wird jedoch auch als autoregulatorischer Faktor für bestimmte Tumoren angesehen, der deren Wachstum auf autokrine Weise stimuliert[2].

• Zelllinien

  human renal proximal tubule cell line

• Konzentrationen

  0.0001-100 nM

• Inkubationszeit

  3 days

• Methode

  Human renal proximal tubule cells plated onto 6-well tissue culture plates are grown at 37°C in DRM-23E medium supplemented with 0.5% (vol/vol) FBS in an incubator for 24 hours. After prewashing with serum-free medium, the cells are incubated with κ-LC (1.5 mg/ml, ∼ 50 μM) for 3 days in the presence and absence of various concentrations of PACAP38 as well as kinase and transcription factor inhibitors. Cell viability is determined by trypan blue exclusion assays; in all experiments, at least 85% of cells remain viable. After exposure to test substances, culture supernatants are harvested and stored at –70°C for cytokine assays. After the medium is removed, the cells are washed with ice-cold PBS, and proteins are extracted by lysing cells with Sigma Mammalian Cell Lysis Reagents. Lysates are scraped and passed through a 21-gauge needle to shear DNA, and centrifuged at 12 000g for 10 minutes at 4°C. Finally, supernatants are harvested and used for kinase studies.

• Tiermodelle

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosierungen

  2 nmol/10 mL

• Verabreichung

  i.v.