PCI-34051

PCI-34051 besitzt eine vielversprechende Potenz für HDAC8 mit einem K_i von 10 nM. Diese Verbindung weist eine hohe Selektivität (ungefähr fünffach) für HDAC8 im Vergleich zu den anderen Klasse-I-HDACs, einschließlich HDAC1, auf. Sie zeigt eine mehr als 200-fache Selektivität gegenüber HDAC1 und HDAC6 sowie eine mehr als 1000-fache Selektivität gegenüber HDAC2, HDAC3 und HDAC10. Diese Chemikalie hemmt die Eierstocktumorlinie OVCAR-3 mit einem GI50 von 6 μM und 15% Zelltod. Weder eine signifikante Tubulin- noch eine Histonacetylierung wird in den empfindlichen Zelllinien beobachtet, die mit dieser Verbindung in Konzentrationen von weniger als 25 μM nach 24 Stunden oder zu früheren Zeitpunkten behandelt wurden. Sie induziert einen selektiven zytotoxischen Effekt nur in Zelllinien, die von T-Zell-Malignitäten abgeleitet sind. Diese Verbindung induziert Caspase-abhängige apoptosis. Wenn die Caspase-3-Aktivität zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Behandlung mit 5 μM dieser Chemikalie gemessen wird, werden zunehmende Aktivitätsniveaus von 12 über 24 bis 48 Stunden beobachtet, ein weiteres Kennzeichen der apoptosis, was mit den höheren Caspase-Aktivitätsniveaus zu diesem Zeitpunkt übereinstimmt. Sie stimuliert keine Bid-Spaltung, ein charakteristischer Effekt des extrinsischen apoptotischen Signalwegs. Während P116 und J.RT3-T.5 empfindlich auf diese Verbindung reagieren, zeigt die PLCγ1-defiziente J.gamma1-Linie eine deutliche Abnahme des Ausmaßes ihrer induzierten apoptosis. Darüber hinaus beeinflussen stationäre Kalziumspiegel die durch diese Chemikalie induzierte apoptosis stark. Sie induziert die Freisetzung von Cytochrom c aus Mitochondrien.[1]

PCI-34051 ist ein potenter und spezifischer HDAC8-Inhibitor.

• Histone deacetylase activity

  Für die PCI-34051-Charakterisierung werden Messungen in einem Reaktionsvolumen von 100 μL unter Verwendung von 96-Well-Assay-Platten in einem Fluoreszenz-Plattenlesegerät durchgeführt. Für jedes Isoenzym. Das HDAC-Protein in Reaktionspuffer (50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0,001 % Tween-20, 5 % Dimethylsulfoxid, pH 7,4, ergänzt mit Rinderserumalbumin in Konzentrationen von 0-0,05 %) wird mit dieser Verbindung in verschiedenen Konzentrationen gemischt und 15 min inkubiert. Trypsin wird zu einer Endkonzentration von 50 nM hinzugefügt, und Acetyl-Gly-Ala-(N-Acetyl-Lys)-amino-4-methylcoumarin wird zu einer Endkonzentration von 25-100 μM hinzugefügt, um die Reaktion zu initiieren. Nach einer Verzögerungszeit von 30 min wird die Fluoreszenz über einen Zeitraum von 30 min unter Verwendung einer Anregungswellenlänge von 335 nm und einer Detektionswellenlänge von 460 nm gemessen. Die Zunahme der Fluoreszenz mit der Zeit wird als Maß für die Reaktionsgeschwindigkeit verwendet.

• Zelllinien

  A549 cell line, Ovcar-3 cell line

• Konzentrationen

  5 μM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  Tumor cell lines and human umbilical vein endothelial cells are cultured for at least two doubling times, and growth is monitored at the end of PCI-34051 exposure using an Alamar Blue fluorometric cell proliferation assay as recommended by the manufacturer. This compound is assayed in triplicate wells in 96-well plates. The concentration required to inhibit cell growth by 50% (GI50) and 95% confidence intervals are estimated from nonlinear regression using a four-parameter logistic equation.

• Tiermodelle

  Male C57BL/6 and BALB/c mice

• Dosierungen

  40 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.