MLN4924 (Pevonedistat)

Katalog-Nr.S7109 Charge:S710909

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Technische Daten

Formel

C21H25N5O4S
Molekulargewicht 443.52 CAS-Nr. 905579-51-3
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 89 mg/mL (200.66 mM)
Ethanol 22 mg/mL (49.6 mM)
Water Insoluble
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung MLN4924 ist ein niedermolekularer Inhibitor des NEDD8 aktivierenden Enzyms (NAE) mit einem IC50 von 4 nM.
Ziele
NAE
(Cell-free assay)
4 nM
In vitro Pevonedistat (MLN4924) ist strukturell verwandt mit Adenosin-59-Monophosphat (AMP) – einem stark bindenden Produkt der NAE-Reaktion. Es (3 μM) hemmt selektiv NAE in HCT-116-Zelllysaten und hemmt den gesamten Proteinumsatz um <9% in HCT-116-Zellen. Diese Verbindung führt zu einer dosisabhängigen Abnahme von Ubc12–NEDD8-Thioester und NEDD8–Cullin-Konjugaten mit einer IC50 < 0,1 μM in HCT-116-Zellen, was zu einem reziproken Anstieg der Häufigkeit der bekannten CRL-Substrate CDT1, p27 und NRF2, aber nicht von Nicht-CRL-Substraten, führt. Es (3 μM) führt dazu, dass sich Zellen bereits nach 8 Stunden in der S-Phase ansammeln und nach 24 Stunden in HCT-116-Zellen ein signifikanter Anteil der Zellen 4N-DNA-Gehalt aufweist. Bei gleicher Konzentration führt es zu einer schnellen Akkumulation von pIkappaBalpha, einer Abnahme des nuklearen p65-Gehalts, einer Reduktion der transkriptionellen Aktivität des nukleären Faktors-kappaB (NF-kappaB) und einem G(1)-Arrest, was letztendlich zur Apoptose-Induktion führt, Ereignisse, die mit einer potenten NF-kappaB-Signalweg-Hemmung in ABC-DLBCL-Zellen übereinstimmen. Bei 1 μM löst es die DNA-Replikation aus und hemmt die Zellproliferation durch Stabilisierung des DNA-Replikationsfaktors Cdt1, einem Substrat der Culline 1 und 4. Diese Konzentration, die ausreicht, um Cdt1 für 4-5 Stunden zu erhöhen, ist ausreichend, um die DNA-Replikation zu induzieren und Apoptose- und Seneszenz-Signalwege zu aktivieren. Die Behandlung mit dieser Verbindung induziert die Merkmale von Seneszenz-Phänotypen, wie durch vergrößerte und abgeflachte zelluläre Morphologie und positive Färbung von Seneszenz-assoziiertem β-Gal belegt. MLN4924-induzierte Seneszenz ist mit der zellulären Reaktion auf DNA-Schäden verbunden, ausgelöst durch die Akkumulation der DNA-Lizenzierungs-Proteine CDT1 und ORC1, als Folge der Inaktivierung von CRL/SCF E3s. Sie ist irreversibel und gekoppelt mit persistierender Akkumulation von p21 und anhaltender Aktivierung der DNA-Schadensreaktion.
In vivo Pevonedistat (MLN4924) (60 mg/kg) führt zu einer dosis- und zeitabhängigen Abnahme der NEDD8–Cullin-Spiegel bereits 30 Minuten nach der Verabreichung bei HCT-116-Tumor-tragenden Mäusen, mit maximaler Wirkung 1–2 Stunden nach der Dosis. Es führt auch zu einem dosis- und zeitabhängigen Anstieg der Steady-State-Spiegel von NRF2 und CDT1 bei HCT-116-Tumor-tragenden Mäusen. Diese Verbindung führt zu DNA-Schäden im Tumor, angezeigt durch erhöhte Spiegel von phosphoryliertem CHK1 bei HCT-116-Tumor-tragenden Mäusen. Bei BID-Verabreichung von 30 mg/kg und 60 mg/kg hemmt es das Tumorwachstum mit T/C-Werten von 0,36 bzw. 0,15 bei Mäusen mit HCT-116-Xenografts. Es (60 mg/kg) blockiert NAE-Signalweg-Biomarker und führt zu einer vollständigen Tumorwachstumshemmung bei Mäusen mit humanen Xenograft-Tumoren von ABC- und GCB-DLBCL. Diese Verbindung (60 mg/kg) führt zu einer NF-kappaB-Signalweg-Hemmung, begleitet von Tumorregressionen in primären humanen Tumormausmodellen von ABC-DLBCL.
Merkmale Ein Mechanismen-basierter Inhibitor von NAE, der ein kovalentes NEDD8-MLN4924-Addukt bildet, das durch das Enzym katalysiert wird.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • In vitro E1 Activating Enzymtests

    Ein zeitaufgelöster Fluoreszenz-Energie-Transfer-Assay-Format wird verwendet, um die In-vitro-Aktivität von NAE zu messen. Die enzymatische Reaktion, enthaltend 50 μL 50 mM HEPES, pH 7,5, 0,05 % BSA, 5 mM MgCl2, 20 μM ATP, 250 μM Glutathion, 10 nM Ubc12–GST, 75 nM NEDD8–Flag und 0,3 nM rekombinantes humanes NAE-Enzym, wird 90 Min. lang bei 24 ℃ in einer 384-Well-Platte inkubiert, bevor sie mit 25 μL Stopp-/Detektionspuffer (0,1 M HEPES, pH 7,5, 0,05 % Tween20, 20 mM EDTA, 410 mM KF, 0,53 nM Europium-Cryptate-markiertem monoklonalem Flag-M2-spezifischem Antikörper und 8,125 μg/mL PHYCOLINK Allophycocyanin (XL-APC)-markiertem GST-spezifischem Antikörper) beendet wird. Nach 2-stündiger Inkubation bei 24 ℃ wird die Platte mit dem LJL Analyst HT Multi-Mode Instrument unter Verwendung einer zeitaufgelösten Fluoreszenzmethode abgelesen. Ein ähnliches Assay-Protokoll wird verwendet, um andere E1-Enzyme zu messen.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    HCT-116 cells

  • Konzentrationen

    3 μM

  • Inkubationszeit

    72 hours

  • Methode

    Cell suspensions are seeded at 3,000–8,000 cells per well in 96-well culture plates and incubated overnight at 37 ℃. Pevonedistat (MLN4924) is then added to the cells in complete growth media and incubated for 72  hours at 37 ℃. Cell number is quantified using the ATPlite assay.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    mice bearing HCT-116 xenografts

  • Dosierungen

    60 mg/kg

  • Verabreichung

    Subcutaneously injection

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19360080/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20525923/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21159650/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21677879/

Kundenproduktvalidierung

Immunoblot analysis of IKZF1/3 and CRBN levels in MM.1S cells treated with Poma (P, 10 nM) for 16 h, after incubating with MLN4924 (M, 0.2 μM) or DMSO for 48 h

Daten von [ , , Leukemia, 2019, 33(1):171-180 ]

BEL7402 or HepG2 cells were transfected with GFP-tagged Hakai and treated with 0.5% DMSO, 10 μM MG132 and 5 μM MLN4924 (c). Endogenous Ajuba levels were determined by immunoblotting using anti-Ajuba antibody. GAPDH was used as a loading control. Densitometry was performed for quantification, and the ratios of Ajuba and GAPDH are presented.

Daten von [ , , J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1):165 ]

(A) Mouse peritoneal macrophages were pretreated with DMSO or MLN4924 for 2 h and then stimulated with LPS or poly(I:C) for the indicated time period. Phosphorylated and total signaling proteins were examined by Western blot analysis.

Daten von [ , , J Immunol, 2016, 196(7):3117-23 ]

Sellecks MLN4924 (Pevonedistat) Wurde zitiert von 153 Publikationen

Multigenerational cell tracking of DNA replication and heritable DNA damage [ Nature, 2025, 642(8068):785-795] PubMed: 40399682
USP7 V517F mutation as a mechanism of inhibitor resistance [ Nat Commun, 2025, 16(1):2526] PubMed: 40087304
SAMD9 senses cytosolic double-stranded nucleic acids in epithelial and mesenchymal cells to induce antiviral immunity [ Nat Commun, 2025, 16(1):3756] PubMed: 40263291
The E3 ligase RNF32 controls the IκB kinase complex and NF-κB signaling in intestinal stem cells [ Mol Cell, 2025, 85(22):4254-4267.e9] PubMed: 41167191
LC3-dependent intercellular transfer of phosphorylated STAT1/2 elicits CXCL9+ macrophages and enhances radiation-induced antitumor immunity [ J Clin Invest, 2025, 135(23)e195279] PubMed: 41321309
Disrupting AGR2/IGF1 paracrine and reciprocal signaling for pancreatic cancer therapy [ Cell Rep Med, 2025, 6(2):101927] PubMed: 39914384
Functional landscape of ubiquitin linkages couples K29-linked ubiquitylation to epigenome integrity [ EMBO J, 2025, 10.1038/s44318-025-00599-7] PubMed: 41125851
Identification of a BACH1 lung cancer signature: A novel tool for understanding BACH1 biology and identifying new inhibitors [ Redox Biol, 2025, 85:103789] PubMed: 40716152
A genome-wide, CRISPR-based screen reveals new requirements for translation initiation and ubiquitination in driving adipogenic fate change [ Genes Dev, 2025, 10.1101/gad.352779.125] PubMed: 40675820
DTL dose-dependent control of sex-dimorphic ferroptosis in liver ischemia reperfusion injury [ Cell Rep, 2025, 44(7):115920] PubMed: 40560731

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