PF-3644022

PF-3644022 ist ein potenter, frei reversibler ATP-kompetitiver Inhibitor von MAPKAPK2 (MK2) mit einem Ki von 3 nM. Diese Verbindung hemmt auch potent die TNFα-Produktion mit einem IC50 von 160 nM.

PF-3644022 ist eine potente, frei reversible ATP-kompetitive Verbindung, die die Aktivität der Mitogen-aktivierten Proteinkinase-aktivierten Proteinkinase 2 (MK2) mit guter Selektivität hemmt, wenn sie gegen 200 menschliche Kinasen profiliert wird. In der menschlichen monozytischen Zelllinie U937 oder peripheren mononukleären Blutzellen hemmt diese Verbindung potent die TNFα-Produktion mit ähnlicher Aktivität. Sie blockiert die TNFα- und IL-6-Produktion in LPS-stimuliertem menschlichem Vollblut.^{<a class="sref" href="#s_ref">[1]</a>}

PF-3644022 zeigt gute pharmakokinetische Parameter bei Ratten und ist oral wirksam sowohl im akuten LPS-induzierten TNFα-Modell bei Ratten als auch im chronischen streptokokkenzellwand-induzierten Arthritismodell mit ED50-Werten von 6,9 bzw. 20 mg/kg.^{<a class="sref" href="#s_ref">[1]</a>}

• In-vitro-Kinaseassays und Hemmkinetik.

  Die Kinaseaktivität von MK2 wird unter Verwendung eines fluoreszenzmarkierten Hitzeschockprotein-27-(HSP27)-Peptids und eines Caliper LabChip 3000 bestimmt. Phosphoryliertes Peptid wird elektrophoretisch vom Substratpeptid getrennt und quantifiziert. Alle Kinase-Reaktionen werden bei Raumtemperatur in 20 mM HEPES, enthaltend 10 mM MgCl2, 1 mM Dithiothreitol, 0,01 % Rinderserumalbumin und 0,0005 % Tween 20, pH 7,5, durchgeführt. Für Endpunkt-Experimente werden die Reaktionen während der linearen Phase durch Zugabe von 30 mM EDTA beendet. Die Kinase-Selektivitätsexperimente werden mit der MgATP-Konzentration, die auf den für jedes Enzym bestimmten Km(app) festgelegt ist, durchgeführt. Die Anfangsgeschwindigkeit wird in Anwesenheit und Abwesenheit dieser Verbindung mit ATP als variiertem Substrat bestimmt, während die HSP27-Peptidkonzentration konstant gehalten wird.

• Zelllinien

  Human U937 monocytic cell line, hPBMCs

• Konzentrationen

  0.1 nM-100μM

• Inkubationszeit

  1 h

• Methode

  U937 cells and hPBMCs are pretreated with PF-3644022 at varying concentrations for 1 h before LPS stimulation at 100 ng/ml. TNFα levels in U937 cell are measured at 4 h after LPS stimulation by using an electrochemoluminescence MesoScale Discovery TNF kit. In hPBMCs, TNFα and IL-6, IL-8 are measured at 16 h after LPS stimulation by using a four-plex human cytokine MSD plate.

• Tiermodelle

  LPS-induced acute endotoxemia inflammation model (adult male Lewis rats), chronic streptococcal cell wall-induced arthritis model (female Lewis rats)

• Dosierungen

  1 mg/kg

• Verabreichung

  Oral gavage