PF-477736

PF-477736 (128 nM) hebt den Camptothecin-induzierten DNA-Schadens-Checkpoint dosisabhängig in CA46- und HeLa-Zellen auf. Diese Verbindung hebt den -induzierten S-Phasen-Arrest mit einem entsprechenden Anstieg apoptotischer Zellpopulationen in HT29-Zellen wirksam auf. Diese Chemikalie (540 nM) verstärkt die -induzierte Zytotoxizität zeit- und dosisabhängig in HT29-Zellen. Sie potenziert die wachstumshemmende Aktivität einer Reihe chemotherapeutischer Wirkstoffe über ein breites Spektrum von p53-defizienten menschlichen Krebszelllinien im MTT-Assay. Die Zugabe dieser Verbindung (360 nM) zu -arrestierten Zellen induziert einen dramatischen Anstieg der Intensität der H2AX-Phosphorylierung, was eine größere Anzahl von γ-H2AX-Molekülen in der Nähe von DNA-Schadensstellen widerspiegelt. [1] Diese Chemikalie (0,5 nM) blockiert selektiv die p73- und P53-Phosphorylierung in Gegenwart von Curcumin in HL-60-Zellen. [2] Es (360 nM) unterdrückt die -induzierte Phosphorylierung von Histon H3 (Ser10) und Cdc25C (Ser216) und potenziert die Apoptose in COLO205-Zellen. [3] Diese Verbindung (250 nM) in Kombination mit MK-1775 weist eine ausgeprägte synergistische zytotoxische Aktivität in OVCAR-5-Zellen auf. Es (250 nM) in Kombination mit MK-1775 verursacht eine Akkumulation von Zellen mit einem DNA-Gehalt zwischen 2N und 4N in OVCAR-5-Zellen. Diese Chemikalie (250 nM) in Kombination mit MK-1775 verursacht eine vorzeitige Mitose vor dem Ende der DNA-Replikation, wobei geschädigte DNA zum apoptotischen Zelltod in OVCAR-5-Zellen führt. [4]

PF-477736 (4 mg/kg i.v.) führt zu einer terminalen Halbwertszeit (T1/2) von 2,9 Stunden, einer AUC von 5,72 μg×hr/mL und einem CLp von 11,8 mL/min/kg bei Ratten. Diese Verbindung verstärkt dosisabhängig die Antitumoraktivität einer maximal tolerierten Dosis im Colo205-Xenograft-Mausmodell. Diese Chemikalie (12 mg/kg) induziert einen Anstieg der Phosphorylierung von Histon H3 (Ser10) und von Phospho-Histon H2AX im Colo205-Xenograft-Mausmodell. [1] Diese Verbindung (15 mg/kg i.p.) verstärkt die induzierte Tumorwachstumshemmung und Tumorwachstumsverzögerung in COLO205- und MDA-MB-231-Xenograft-Modellen. [3] Diese Chemikalie (10 mg/kg einmal täglich i.p.) in Kombination mit MK-1775 (30 mg/kg zweimal täglich oral) führt zu einer stärkeren Tumorwachstumshemmung bei Mäusen mit OVCAR-5-Xenografts. [4]

• Bindungstest

  Der Assay wird in einer 96-Well-Platte für 20 Minuten bei 30℃ in 0,1 mL Assay-Puffer durchgeführt, der 50 mM TRIS pH 7,5, 0,4 M NaCl, 4 mM PEP, 0,15 mM NADH, 28 Einheiten Laktatdehydrogenase/mL, 16 Einheiten Pyruvatkinase/mL, 3 mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15 mM ATP und 25 mM Magnesiumchlorid enthält. Die Assays werden mit 1 nM CHK1-Kinasedomäne initiiert. Die Hemmung der CHK1-Aktivität wird durch Messung der Anfangsgeschwindigkeiten in Gegenwart unterschiedlicher Konzentrationen dieser Verbindung bestimmt. Die Daten werden mit Enzymkinetik- und Excel-Software analysiert und an ein kinetisches Modell für kompetitive Hemmung angepasst, um einen Ki-Wert zu erhalten. Die Kinase-Selektivität dieser Chemikalie wird durch Screening bei 1 μM oder 10 μM gegen ein Panel von etwa 100 Proteinkinasen bewertet.

• Zelllinien

  HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 and K562 cells

• Konzentrationen

  ~1 μM

• Inkubationszeit

  96 hours

• Methode

  The IC50 assay measures the antiproliferative effects of PF-477736 on p53-defective human cancer cell lines. Cells in each line are seeded in complete medium at an exponentially growing density in 96-well assay plate and allowed to attach for 16 hours. Serial dilutions of this compound are then done, and appropriate controls are added to each plate. Cells are incubated with drug for 96 hours. After incubation, MTT working stock diluted in complete medium is added to each well, and cells are incubated for 4 hours. After centrifugation and supernatant removal, DMSO is added to each well and plates are read on SpectraMax plate reader at 540 nm.

• Tiermodelle

  Colo205 xenograft mouse model

• Dosierungen

  40 mg/kg

• Verabreichung

  intravenous injection