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Biologische Beschreibung
| Spezifität | Phospho-Tau (Ser262) Antibody [N15P23] detektiert endogene Spiegel des gesamten Tau-Proteins nur, wenn es an Ser262 phosphoryliert ist. |
|---|---|
| Hintergrund | Phospho-Tau (Ser262) bezieht sich auf das Mikrotubuli-assoziierte Protein Tau, phosphoryliert an Serin 262 innerhalb seiner prolinreichen Mikrotubuli-Bindungs-Repeat-Domäne (R1/R2-Verbindung), existierend als nativ unstrukturierte Isoform (0N, 1N, 2N Varianten), die vier unvollständige Mikrotubuli-Bindungs-Repeats (MTBRs) mit 275-VQIVYK283 KXGS-Motiven enthält; die Phosphorylierung an Ser262, oft begleitet von pSer356, stört das durch MARK2/Par-1-Kinase vorbereitete KXGS-Epitop und reduziert die Affinität von Tau für β-Tubulin drastisch (Kd-Verschiebungen >10-fach), indem sie sterisch mit dem Mikrotubuli-Gitter interferiert. Initiiert durch Amyloid-β-Oligomere, die MARK2 über Calpain-Spaltung oder CDK5/p25-Hyperaktivierung aktivieren, löst dieses Phosphorylierungsereignis eine schnelle Mikrotubuli-Depolymerisation durch konformatives Entbinden aus, da pSer262 die R1/R2-Inter-Repeat-Schleife in einem ungeordneten Zustand fixiert und dadurch distale Phosphorylierungsstellen (Ser202/Thr205, Ser396/Ser404) für die Vorbereitung durch GSK3β/Fyn exponiert. Diese sequentielle Phosphorylierung fördert die Tau-Oligomerisierung zu toxischen 4R-Präfibrillen-Keimen, die zur trans-synaptischen Propagation über neuronale Aufnahme und Exozytose fähig sind, während sie eine Tau-Fehlverlagerung von den Axonen in somatodendritische Kompartimente verursacht. Physiologisch reguliert das vorübergehende Cycling von pSer262 über PP2A-vermittelte Dephosphorylierung die Mikrotubuli-Dynamik während der neuronalen Plastizität, aber eine chronische Hyperphosphorylierung, die bei der Alzheimer-Krankheit (Braak I-II) erhöht ist, geht der Neurofibrillen-Tangle (NFT)-Bildung um Jahre voraus und etabliert pSer262 als einen „frühen Gatekeeper“-Biomarker, der in der Zerebrospinalflüssigkeit (pTau262/Tau-Verhältnis) nachweisbar ist und Aβ42-Synaptotoxizität, synaptischen Verlust und kognitiven Rückgang mit Spezifität für granuläre Prä-Tangles gegenüber reifen gepaarten helikalen Filamenten (PHFs) vermittelt. |
Nutzungsinformationen
| Anwendung | IHC, ELISA | Verdünnung |
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|---|---|---|---|---|---|
| Reaktivität | Human | ||||
| Quelle | Mouse Monoclonal Antibody | MW | 33-79 kDa | ||
| Lagerpuffer | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Lagerung (Ab dem Datum des Erhalts) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IHC |
Experimental Protocol：
Deparaffinization/Rehydration
1. Deparaffinize/hydrate sections:
2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.
3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.
4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.
5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.
6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.
Staining
1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.
2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.
3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
4. Wash sections in wash buffer for 5 min.
5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.
6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.
7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.
8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.
9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.
10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.
11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.
12. Immerse slides in dH2O.
13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.
14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.
15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.
16. Mount sections with coverslips and mounting medium.
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Referenzen
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