Pomalidomide (CC-4047)

Pomalidomide hemmt die durch Lipopolysaccharid (LPS) stimulierte TNF-alpha-Freisetzung in menschlichen PBMC und in menschlichem Vollblut mit IC50-Werten von 13 nM bzw. 25 nM. [1] Diese Verbindung hemmt das Wachstum von durch IL-2 stimulierten T-regulatorischen Zellen mit einer IC50 von ~1 μM. [2] Die Behandlung mit dieser Chemikalie (6,4 nM-10 μM) erhöht die Produktion von IL-2 in menschlichen peripheren Blut-T-Zellen und ist in der CD4+-Untergruppe etwas potenter als in der CD8+-Untergruppe. Es ist signifikant potenter als CC-5013 bei der Erhöhung von IL-2-, IL-5- und IL-10-Spiegeln, aber nur geringfügig potenter als CC-5013 bei der Erhöhung von IFN-γ-Spiegeln. Dieses Mittel verstärkt die SEE- und Raji-Zellen induzierte AP-1-Transkriptionsaktivität in Jurkat-Zellen dosisabhängig, mit einer maximalen Verstärkung von 4-fach bei 1 μM. [3] Die Exposition von Raji-Zellen gegenüber verschiedenen Konzentrationen dieser Verbindung (2,5-40 μg/mL) über 48 Stunden führt zu einer signifikanten Abnahme der Zellproliferation und DNA-Synthese. Es gibt eine Reduktion von ~40% im Vergleich zu Vehikel-behandelten Kontrollen. [4]

Pomalidomide verstärkt die Antitumorwirkung von Rituximab gegen B-Zell-Lymphome in Mäusen mit schwerem kombiniertem Immundefekt. Die Verabreichung dieser Verbindung in Kombination mit Rituximab verleiht den Mäusen eine mediane Überlebenszeit von 74 Tagen im Vergleich zu 58 Tagen bei CC5013/Rituximab-Behandlung und 45 Tagen bei Rituximab-Monotherapie. Der synergistische Effekt dieser Verbindung und Rituximab kann durch die Depletion von NK-Zellen vollständig aufgehoben werden, was die Annahme unterstützt, dass die Expansion von NK-Zellen ein Mechanismus ist, durch den diese Verbindung die Antitumoraktivität von Rituximab verstärken kann. [4]

• Hemmung der TNF-α-Synthese

  Die TNF-α-hemmende Aktivität wird in Lipopolysaccharid (LPS)-stimulierten PBMC gemessen. Pomalidomide wird den menschlichen PBMCs 1 Stunde vor der Zugabe von LPS (1 μg/mL) zugesetzt und die Inkubation für weitere 18-20 Stunden fortgesetzt. Die Überstände werden dann geerntet und die Konzentration von TNF-α in den Überständen wird mittels ELISA bestimmt. Die Konzentration dieser Verbindung, die die TNF-Produktion um 50% hemmt (IC50), wird mittels nichtlinearer Regressionsanalyse berechnet. Der menschliche Vollblut-TNF-Inhibitionsassay wird ähnlich wie der PBMC-Assay durchgeführt, außer dass heparinisiertes frisches menschliches Vollblut direkt in Mikrotiterplatten plattiert wird.

• Zelllinien

  Raji, SU-DHL-4 and SU-DHL-10 cell lines

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations 2.5-40 μg/mL

• Inkubationszeit

  24 or 48 hours

• Methode

  For assessment of cell apoptosis, Lymphoma cell lines are exposed to Pomalidomide (5 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. The cells are stained with FITC-labeled Annexin V and propidium iodine. Cell apoptosis is analyzed by multicolor flow cytometric analysis using a fluorescence-activated cell sorter/FACStar Plus flow cytometer. Cells are scored as apoptotic if they are Annexin V–positive and propidium iodine–negative/positive (early and late apoptosis, respectively). For determination of cell proliferation, the Lymphoma cell lines are exposed to this compound (2.5, 5, 10, 20, and 40 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. 1 μCi per well (96-well plate) of [³H]-thymidine is added and cells are incubated for another 18 hours. Cells are then harvested using the Harvest system into the 96-well glass filters and [³H]-thymidine uptake is measured using an automated scintillation counter.

• Tiermodelle

  Disseminated lymphoma-bearing SCID mice

• Dosierungen

  0.5 mg/kg

• Verabreichung

  Injection i.p.