Refametinib (RDEA119)

Katalog-Nr.S1089 Charge:S108902

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Technische Daten

Formel

C19H20F3IN2O5S
Molekulargewicht 572.34 CAS-Nr. 923032-37-5
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (174.72 mM)
Ethanol 100 mg/mL (174.72 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 5.000mg/ml (8.74mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.710mg/ml (1.24mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 14.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Refametinib (RDEA119, Bay 86-9766) ist ein potenter, ATP-nicht-kompetitiver und hochselektiver Inhibitor von MEK1 und MEK2 mit einer IC50 von 19 nM bzw. 47 nM.
Ziele
MEK1
(Cell-free assay)		 MEK2
(Cell-free assay)
19 nM 47 nM
In vitro Refametinib (RDEA119) bindet selektiv direkt an eine allosterische Tasche in den MEK1/2-Enzymen und ist hochwirksam bei der Hemmung der Zellproliferation in mehreren Tumorzelllinien, einschließlich A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 und BxPC3. Es hemmt das Verankerungs-abhängige Wachstum menschlicher Krebszelllinien, die die Gain-of-Function-V600E-BRAF-Mutante beherbergen, mit GI50-Werten im Bereich von 67 bis 89 nM. Unter Verankerungs-unabhängigen Bedingungen sind die GI50-Werte für alle getesteten Zelllinien ähnlich (40-84 nM). Diese Verbindung zeigt eine Gewebeselektivität, die ihr Potenzial für Nebenwirkungen im Zusammenhang mit dem zentralen Nervensystem reduziert. Es hemmt potent die Proliferation der 4 Zelllinien, die eine BRAF-Mutation aufwiesen, hat aber keine oder geringe Auswirkungen auf die anderen 4 Zellen, die Wildtyp-BRAF aufwiesen (IC50 von 0,034-0,217 μM vs. 1,413-34,120 μM). Die hemmende Wirkung von Refametinib in ausgewählten Zelllinien OCUT1 (BRAF V600E(+), PIK3CA H1047R(+)) und SW1376 (BRAF V600E(+)) wird durch die Kombination mit dem mTOR-Inhibitor Temsirolimus verstärkt. Es und Temsirolimus zeigen auch synergistische Effekte auf den autophagischen Tod von OCUT1- und KAT18-Zellen, die selektiv getestet wurden.
In vivo Die orale Verabreichung von RDEA119 in einer Dosis von 50 mg/kg einmal täglich für 14 Tage führt zu einer 68%igen Tumorwachstumshemmung (TGI) im humanen Melanom-A375-Tumormodell. Diese Verbindung in einer Dosis von 25 mg/kg einmal täglich für 14 Tage führt zu einer 123%igen TGI im humanen Kolonkarzinom-Colo205-Tumormodell (TGI > 100% tritt auf, wenn der Tumor unter sein Ausgangsvolumen schrumpft). Eine Dosis von 25 mg/kg einmal täglich für 14 Tage erzeugt 56% und 67% TGI für HT-29- bzw. A431-Tumoren.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • MEK-Kinase-Assay

    Kinase-inaktive murine ERK2 (mERK2) K52A/T183A wird aus Escherichia coli, die mit dem pET21a-Vektor exprimiert wurden, affinitätsgereinigt. Die MEK1-Kinaseaktivität wird unter Verwendung von mERK2 K52A T183A als Substrat bestimmt. Rekombinantes MEK1-Enzym (5 nM) wird zunächst durch 0,02 Einheiten oder 1,5 nM RAF1 in Gegenwart von 25 mM HEPES (pH 7,8), 1 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0,2 mM EDTA und 50 μM ATP für 30 Minuten bei 25 °C aktiviert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 2 μM mERK2K52A T183A und 2,5 μCi [γ-33P] ATP in einem Gesamtvolumen von 20 μL gestartet. Die MEK2-Kinaseaktivität wird ähnlich bestimmt, außer dass die Aktivierung durch RAF1 nicht erforderlich ist und 11 nM MEK2-Enzym (aktiv) in den Assays verwendet werden. Das Kinase-Profiling für Refametinib (RDEA119) wird von Invitrogen unter Verwendung ihres Select Screen Kinase Profiling Service durchgeführt. Der Z'-LYTE-Biochemie-Assay wird verwendet. Diese Verbindung wird in Vierfachbestimmung bei 10 μM gegen 205 Kinasen getestet.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    A375, SK-MEI-28, Colo205, HT-29 and BxPC3 cells

  • Konzentrationen

    10-1000 nM

  • Inkubationszeit

    48 hours

  • Methode

    For anchorage-dependent growth inhibition experiments, cells are plated in white 384-well plates at 1,000/20 μL/well or white 96-well microplates at 4,000/100 μL/well. After 24-h incubation at 37 °C, 5% CO2, and 100% humidity, Refametinib (RDEA119) is incubated for 48 hours at 37 °C and assayed using CellTiter-Glo. For the 96-well anchorage-independent growth assay, wells of an “ultralow binding” plate (Corning) are filled with 60 μL of a 0.15% agarose solution in complete RPMI 1640. Then, 60 μL of complete RPMI 1640 containing 9,000 cells in 0.15% agarose are added per well. After 24 hour, 60 μL of a 3 × drug solution in agarose-free complete RPMI 1640 are added. After 7 d, 36 μL of 6 × 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)- 2H-tetrazolium, inner salt reagent are added per well. After 2 hours at 37 °C, absorbance at 490 nm is determined on the M5 plate reader.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    Female athymic nude mice are injected s.c. with A375, HT-29 and A431 tumor; male athymic nude mice with Colo205 tumor.

  • Dosierungen

    25 or 50 mg/kg

  • Verabreichung

    Orally once daily for 14 days

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19706763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21351275/

Kundenproduktvalidierung

RDEA119 (1 µM) or JTP-74057 (0.1 µM) abolished the effects of G1 on DAPK1 and NR2B phosphorylation.

Daten von [ , , J Neurosci, 2012, 32(14): 4887-900 ]

Western blot analyses of downstream effector proteins of the MAPK signaling pathway. The panel of CRC cell lines was treated with or without refametinib (1 lM) for 72 h. a-Tubulin served as a loading control.

Daten von [ , , Mol Oncol, 2018, 12(8):1398-1409 ]

B: ERK and p-ERK1/2 levels in response to MEKi treatment. Tra = trametinib, Ref = refametinib, Sel = selumetinib, Bin = binimetinib. Films were intentionally overexposed to detect signal in lanes with low p-ERK1/2 expression. For each cell line all treatment conditions were performed as part of the same experiment. All experimental findings were confirmed in independent experiments performed in triplicate. Note: membranes incubated with p-ERK1/2 antibody were overexposed to capture all remaining signal after MEKi treatment. WB images have been cut to keep the same sample order. All membranes incubated with the same antibody have been exposed for the same period of time.

Daten von [ , , Am J Cancer Res, 2016, 6(10):2235-2251 ]

MEK inhibition of hypoosmolar-induced ADM. In all panels KrasG12D acinar explants were isolated and starved overnight. The next day explants were incubated with hypoosmotic (150 mOsm) medium for 5 min and then refametinib was added at the indicated concentrations. (A) HRP assay from two mice was performed immediately after the 5 min hypoosmotic treatment. Mean ± SD, two-tailed t-test. (B) Acinar explants were seeded in collagen and ADM was quantified at day 4. N = number of mice. Mean ± SD, two-tailed t-test. (C) Representative bright field images of acinar explants described in B. Dashed lines highlight acinar cell clusters, arrowheads: duct-like structures. Scale bars = 50 μm.

Daten von [ , , EBioMedicine, 2017, 15:90-99 ]

Sellecks Refametinib (RDEA119) Wurde zitiert von 29 Publikationen

System analysis links SMARCD3 regulons to growth signaling and MEK inhibitor response in everolimus-resistant ER+ breast cancer cells [ Cell Rep Med, 2025, 6(11):102425] PubMed: 41260207
Histone deacetylase inhibitors promote breast cancer metastasis by elevating NEDD9 expression [ Signal Transduct Target Ther, 2023, 8(1):11] PubMed: 36604412
Salmonella effector SopB reorganizes cytoskeletal vimentin to maintain replication vacuoles for efficient infection [ Nat Commun, 2023, 14(1):478] PubMed: 36717589
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, S2666-3791(23)00367-1] PubMed: 37734378
Signaling-induced systematic repression of miRNAs uncovers cancer vulnerabilities and targeted therapy sensitivity [ Cell Rep Med, 2023, 4(10):101200] PubMed: 37734378
Protein Tyrosine Phosphatase Non-Receptor 11 (PTPN11/Shp2) as a Driver Oncogene and a Novel Therapeutic Target in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) [ Int J Mol Sci, 2023, 24(13)10545] PubMed: 37445722
Anatomic position determines oncogenic specificity in melanoma [ Nature, 2022, 604(7905):354-361] PubMed: 35355015
NOTCH signaling limits the response of Low Grade Serous Ovarian Cancers to MEK inhibition [ Mol Cancer Ther, 2022, MCT-22-0004] PubMed: 36198031
Secondary resistance to anti-EGFR therapy by transcriptional reprogramming in patient-derived colorectal cancer models [ Genome Med, 2021, 13(1):116] PubMed: 34271981
Targeting the PI3K and MAPK pathways to improve response to HER2-targeted therapies in HER2-positive gastric cancer [ J Transl Med, 2021, 19(1):184] PubMed: 33933113

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