Regorafenib (BAY 73-4506)

Regorafenib verhindert stark die VEGFR2-Autophosphorylierung in NIH-3T3/VEGFR2-Zellen mit einer IC50 von 3 nM. In HAoSMCs unterdrückt diese Verbindung die PDGFR-β-Autophosphorylierung nach Stimulation mit PDGF-BB mit einer IC50 von 90 nM. Es hemmt auch die FGFR-Signalübertragung in MCF-7-Brustkrebszellen (BC), die mit FGF10 stimuliert wurden. Diese Chemikalie hemmte sehr potent die mutierten Rezeptoren KIT^K642E und RET^C634W mit einer IC50 von etwa 20 nM bzw. 10 nM. Es hemmt die Proliferation von VEGF¹⁶⁵-stimulierten HUVECs mit einer IC50 von etwa 3 nM. Diese Verbindung verhindert die Proliferation von FGF2-stimulierten HUVECs und von PDGF-BB-stimulierten HAoSMCs mit einer IC50 von 127 nM bzw. 146 nM. [1] Es zielt sowohl auf die Tumorzellproliferation als auch auf die Tumorgefäßbildung durch Hemmung von Rezeptoren von Protein Tyrosine Kinase (VEGFR, KIT, RET, FGFR und PDGFR) und Serin/Threonin-Kinasen (Raf und p38MAPK) ab. [2] Diese Chemikalie unterdrückt das Wachstum von menschlichen Hep3B-, PLC/PRF/5- und HepG2-Zellen in einer konzentrations- und zeitabhängigen Weise. [3]

Regorafenib zeigt eine potente dosisabhängige TGI in verschiedenen präklinischen humanen Xenograft-Modellen bei Mäusen, mit Tumorschrumpfungen in Brust-MDA-MB-231- und Nieren-786-O-Karzinommodellen. Diese Verbindung verhindert nicht nur das Wachstum von syngenen primären 4T1-Brusttumoren, die orthotop im Fettpolster wachsen, sondern unterdrückt auch die Bildung von Tumormetastasen in der Lunge. [1]

• Kinase-Assays

  In-vitro-Assays unter Verwendung rekombinanter VEGFR2 (murine aa785–aa1367), VEGFR3 (murine aa818–aa1363), PDGFRβ (aa561–aa1106), Raf-1 (aa305–aa648) und BRafV600E (aa409–aa765) Kinasedomänen werden durchgeführt. Die anfängliche In-vitro-Kinase-Inhibitions-Profilierung wird bei einer fixen Konzentration von 1 μM dieser Verbindung durchgeführt. Inhibitorische Konzentration von 50 % (IC50)-Werte werden aus ausgewählten ansprechenden Kinasen, z.B. VEGFR1 und RET, bestimmt. Die TIE2-Kinase-Hemmung wird mit einem homogenen zeitaufgelösten Fluoreszenz (HTRF)-Assay unter Verwendung eines rekombinanten Fusionsproteins von Glutathion-S-Transferase, der intrazellulären Domäne von TIE2 und dem Peptid Biotin-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG als Substrat gemessen.

• Zelllinien

  GIST 882 and TT cells

• Konzentrationen

  5 nM-10 μM

• Inkubationszeit

  96 hours

• Methode

  For proliferation assays, GIST 882 and TT cells are grown in RPMI medium containing L-glutamine, and MDA-MB-231, HepG2 and A375 cells in DMEM always containing 10% hiFBS. Cells are trypsinized, plated at 5×10⁴ cells/well in 96-well plates in complete media containing 10% FBS and grown overnight at 37 °C. The next day, vehicle or Regorafenib serially diluted in complete growth media to between 10 μM and 5 nM final concentrations, and 0.2% DMSO, is added and incubation is continued for 96 hours. Cell proliferation is quantified.

• Tiermodelle

  Female athymic NCr nu/nu mice with Colo-205, MDA-MB-231 or 786-O

• Dosierungen

  3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

• Verabreichung

  Orally