RKI-1447

Katalog-Nr.S7195 Charge:S719501

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Technische Daten

Formel

C16H14N4O2S
Molekulargewicht 326.37 CAS-Nr. 1342278-01-6
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 65 mg/mL (199.16 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
15% Captisol

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 15% Captisol clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 10.000mg/ml (30.64mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 200 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.250mg/ml (0.77mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung RKI-1447 ist ein potenter Inhibitor von ROCK1 und ROCK2 mit einer IC50 von 14,5 nM bzw. 6,2 nM und besitzt antiinvasive und antitumorale Aktivitäten.
Ziele
ROCK2
(Cell-free assay)		 ROCK1
(Cell-free assay)
6.2 nM 14.5 nM
In vitro

RKI-1447 ist ein zellgängiges Pyridylthiazolyl-Harnstoffderivat, das als potenter, auf die ATP-Bindungsstelle zielender Rho-Kinase-Inhibitor wirkt und eine stark reduzierte Wirksamkeit gegen PKA, PKN1/PRK1, p70S6K/RPS6kB1, AKT1, MRCKa/CDC42BPA (85,5 %, 80,5 %, 61,9 %, 56,0 % bzw. 50,4 % Hemmung durch 1 µM dieser Verbindung) oder 15 andere Kinasen aufweist. Kristallstrukturen des Chemikalien-/ROCK1-Komplexes zeigen, dass dieser Inhibitor ein Typ-I-Kinase-Inhibitor ist, der durch Wechselwirkungen mit der Hinge-Region und dem DFG-Motiv an die ATP-Bindungsstelle bindet. Er unterdrückt die Phosphorylierung der ROCK-Substrate MLC-2 und MYPT-1 in menschlichen Krebszellen, hatte aber bei Konzentrationen von bis zu 10 μM keinen Einfluss auf die Phosphorylierungsspiegel von AKT, MEK und S6-Kinase. Diese Verbindung ist auch hochselektiv bei der Hemmung der ROCK-vermittelten Zytoskelett-Reorganisation (Aktin-Stressfaserbildung) nach LPA-Stimulation, beeinflusst aber nicht die PAK-vermittelte Lamellipodien- und Filopodienbildung nach PDGF- und Bradykinin-Stimulation. Er hemmt die Migration, Invasion und das Verankerungs-unabhängige Tumorwachstum von Brustkrebszellen.

In vivo

RKI-1447 ist hochwirksam bei der Hemmung des Auswachsens von Mammatumoren in einem transgenen Mausmodell. Tumoren von Mäusen, die mit dieser Verbindung behandelt wurden, nahmen in ihrer Größe mit einer durchschnittlichen prozentualen Änderung des Tumorvolumens von nur 8,8 % zu. Somit hemmte es das Mammatumorwachstum um 87 %, und im Durchschnitt waren die Mammatumoren von Mäusen, die mit dieser Chemikalie behandelt wurden, im Vergleich zu den Tumoren von Mäusen, die mit dem Vehikel kontrolliert wurden, 7,7-fach kleiner. Diese Verbindung Behandlungen führte nicht zu Gewichtsverlust der Maus.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[2]
  • Z-Lyte FRET-Kinase-Assay

    Die Kinasehemmung wird mit dem Invitrogen Z-Lyte® FRET-Kinase-Assay unter Verwendung des Ser/Thr 13-Peptidsubstrats gemessen, das auf der Myosin-Leichtkettensequenz KKRPQRRYSNVF basiert. Diese Verbindung wird an drei verschiedenen Tagen mit 8-Punkt-Verdünnungen in Duplikaten getestet, um durchschnittliche IC50-Werte zu bestimmen. Die Assay-Bedingungen sind optimiert auf 15 μL des Kinase-Reaktionsvolumens mit 5 ng Enzym in 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA und 0,01 % Brij-35. Die Reaktion wird 1 Stunde lang bei Raumtemperatur in Gegenwart von 1,5 μM Peptidsubstrat mit 12,5 μM ATP (für ROCK1) oder 2 μM Substrat mit 50 μM ATP (für ROCK2) inkubiert.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    MDA-MB-231

  • Konzentrationen

    ~600 μM

  • Inkubationszeit

    72 h

  • Methode

    Cells are plated in a 96 well tissue culture plate (1200 cells per well) and incubated for 24 hours. After incubation the cells are treated with vehicle or increasing concentrations of RKI-1447 for 72 hours. After incubation, freshly prepared MTT (2mg/ml) is added to each well and incubated for 3 hours. After incubation the plates are read at 540 nm.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    MMTV/neu transgenic mice [FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

  • Dosierungen

    200 mpk/day

  • Verabreichung

    i.p.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22846914/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23275831/

Kundenproduktvalidierung

(d) ROCK inhibition blocks CC-RCC migration in a transwell assay. RCC10 or 786-O cells were treated with Y-27632, RKI 1447 or DMSO vehicle (as indicated) for 6 h. The assay was performed in duplicate and the experiment was repeated three times. Statistical analysis in (b-d) was performed using a paired t-test comparing each normalized dose to the negative control (*P<0.05, **P<0.01 and ***P<0.001); s.e.m.

Daten von [ , , Oncogene, 2016, 1-10. ]

Western blotting analysis of the indicated proteins in MSC-4H-FC cells treated with increasing concentrations of dasatinib, PF-573228, or RKI-1447 for 24 hours. β-Actin levels were used as loading control.

Daten von [ , , Neoplasia, 2018, 20(1):44-56 ]

The cells were treated with 5 μM of the PAK1-specific inhibitor IPA-3 or 1 μM of the ROCK1/2-specific inhibitor RKI-1447 for 24 h. Total cell lysates were immunoblotted with antibodies against p110β, p110δ, p-PAK1, PAK1, ROCK1, ROCK2, p-LIMK1, LIMK1 or β-actin, which served as an internal control. The results are representative of three independent experiments.

Daten von [ , , Anticancer Res, 2017, 37(4):1805-1818 ]

Sellecks RKI-1447 Wurde zitiert von 12 Publikationen

Therapeutic targeting of tumor spheroids in a 3D microphysiological renal cell carcinoma-on-a-chip system [ Neoplasia, 2023, 10.1016/j.neo.2023.100948] PubMed: 37944353
Correlating Basal Gene Expression across Chemical Sensitivity Data to Screen for Novel Synergistic Interactors of HDAC Inhibitors in Pancreatic Carcinoma [ Pharmaceuticals (Basel), 2023, 16(2)294] PubMed: 37259439
Establishment and characterization of immortalized sweat gland myoepithelial cells [ Sci Rep, 2022, 12(1):7] PubMed: 34997030
İnsan kornea endotel hücreleri üzerine farklı RHO kinaz inhibitörlerinin etkinliğinin araştırılması [ GCRIS, 2022, ] PubMed: none
Synapse-specific Lrp4 mRNA enrichment requires Lrp4/MuSK signaling, muscle activity and Wnt non-canonical pathway [ Cell Biosci, 2021, 11(1):105] PubMed: 34090516
RKI-1447 suppresses colorectal carcinoma cell growth via disrupting cellular bioenergetics and mitochondrial dynamics. [ J Cell Physiol, 2020, 235(1):254-266] PubMed: 31237697
A novel human colon signet-ring cell carcinoma organoid line: establishment, characterization and application [ Carcinogenesis, 2020, 41(7):993-1004] PubMed: 31740922
[ Cell Rep, 2019, ] PubMed: 31825822
FUS-CHOP Promotes Invasion in Myxoid Liposarcoma through a SRC/FAK/RHO/ROCK-Dependent Pathway [Tornin J Neoplasia, 2018, 20(1):44-56] PubMed: 29190494
Prominent oncogenic roles of EVI1 in breast carcinoma [Wang H Cancer Res, 2017, 77(8):2148-2160] PubMed: 28209621

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NICHT FÜR DIE ANWENDUNG AM MENSCHEN, FÜR VETERINÄRMEDIZINISCHE DIAGNOSTIK ODER THERAPEUTISCHE ZWECKE.