Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

INCB018424 hemmt potent und selektiv die JAK2V617F-vermittelte Signalgebung und Proliferation in Ba/F3-Zellen und HEL-Zellen. INCB018424 erhöht die Apoptose in Ba/F3-Zellen dosisabhängig signifikant. INCB018424 (64 nM) führt zu einer Verdopplung der Zellen mit depolarisierten Mitochondrien in Ba/F3-Zellen. INCB018424 hemmt die Proliferation von erythroiden Progenitoren von normalen Spendern und Polycythaemia vera-Patienten mit einer IC50 von 407 nM bzw. 223 nM. INCB018424 zeigt eine bemerkenswerte Potenz gegen die erythroidale Koloniebildung mit einer IC50 von 67 nM. [1]

INCB018424 (180 mg/kg, oral, zweimal täglich) führt in einem JAK2V617F-getriebenen Mausmodell zu einer Überlebensrate von über 90% bis Tag 22. INCB018424 (180 mg/kg, oral, zweimal täglich) reduziert signifikant die Splenomegalie und die zirkulierenden Spiegel entzündlicher Zytokine und eliminiert bevorzugt neoplastische Zellen, was zu einem signifikant verlängerten Überleben ohne myelosuppressive oder immunsuppressive Effekte in einem JAK2V617F-getriebenen Mausmodell führt. [1] Der primäre Endpunkt wird bei 41,9% der Patienten in der Ruxolitinib-Gruppe im Vergleich zu 0,7% in der Placebo-Gruppe in der doppelblinden Studie zur Myelofibrose erreicht. Ruxolitinib führt zur Aufrechterhaltung der Milzvolumenreduktion und einer Verbesserung von 50% oder mehr im gesamten Symptom-Score. [2] Insgesamt 28% der Patienten in der Ruxolitinib-Gruppe (15 mg zweimal täglich) weisen in Woche 48 bei Patienten mit Myelofibrose eine Milzvolumenreduktion von mindestens 35% auf, verglichen mit 0% in der Gruppe, die die beste verfügbare Therapie erhielt. Die mittlere palpable Milzlänge hat sich mit Ruxolitinib um 56% verringert, aber mit der besten verfügbaren Therapie in Woche 48 um 4% erhöht. Patienten in der Ruxolitinib-Gruppe zeigten eine Verbesserung der allgemeinen Lebensqualitätsmessungen und eine Reduktion der mit Myelofibrose verbundenen Symptome. [3]

• Bindungsassay

  Rekombinante Proteine werden mittels Sf21-Zellen und Baculovirus-Vektoren exprimiert und mittels Affinitätschromatographie gereinigt. Für JAK-Kinase-Assays wird ein homogenes zeitaufgelöstes Fluoreszenz-Assay mit dem Peptidsubstrat (-EQEDEPEGDYFEWLE) verwendet. Jede Enzymreaktion wird mit Ruxolitinib oder Kontrolle, JAK-Enzym, 500 nM Peptid, Adenosintriphosphat (ATP; 1mM) und 2% Dimethylsulfoxid (DMSO) für 1 Stunde durchgeführt. Die 50%ige Hemmkonzentration (IC50) wird als die INCB018424-Konzentration berechnet, die für die Hemmung von 50% des Fluoreszenzsignals erforderlich ist.

• Zelllinien

  Ba/F3 and HEL cells

• Konzentrationen

  3 μM

• Inkubationszeit

  48 h

• Methode

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• Tiermodelle

  JAK2V617F-driven mouse model

• Dosierungen

  180 mg/kg

• Verabreichung

  o.g.