SB415286

SB415286 hemmt GSK3α ATP-kompetitiv mit einem K_i von 31 nM und zeigt eine ähnliche Potenz gegen GSK3β. Diese Verbindung hat wenig oder keine Aktivität gegen 24 andere Proteinkinasen mit IC50 > 10 μM. Sie stimuliert die Glykogensynthese in der Chang-Humanleberzelllinie mit einer EC50 von 2,9 μM und induziert die Expression eines β-Catenin-LEF/TCF-regulierten Reportergens in HEK293-Zellen. [1] Es schützt Neuronen des zentralen und peripheren Nervensystems in Kultur vor dem Tod, der durch eine reduzierte PI3K/Akt/mTOR-Weg-Aktivität induziert wird, und zwar konzentrationsabhängig, was mit der Hemmung der GSK-3-Aktivität und der Modulation der GSK-3-Substrate tau und β-Catenin korreliert ist. [2] In L6-Myotuben induziert diese Chemikalie eine wesentlich stärkere Aktivierung von GS (6,8-fach) im Vergleich zu der durch Insulin (4,2-fach) oder Li (4-fach) hervorgerufenen. [3] Diese Verbindung (10 μM) hemmt die Rapamycin-induzierte Herunterregulierung von Cyclin D1 und blockiert Rapamycin- und -induzierte Apoptosis, was auf eine kritische Rolle von GSK3β bei der Rapamycin-vermittelten -Sensibilisierung hindeutet. [4] Es verhindert Coxsackievirus-induzierten Zelltod dosisabhängig durch Stabilisierung von β-Catenin. [5] Diese Chemikalie übt eine schützende Wirkung auf Wasserstoffperoxid-induzierten Zelltod in B65-Rattenneuroblastomzellen und Neuronen aus, während Lithium die toxischen Wirkungen von Wasserstoffperoxid nicht abschwächt. [7] Ihre Behandlung verstärkt TRAIL- und CH-11-induzierte Apoptosis in HepG2-Zellen. [8] Die Hemmung von GSK-3 durch diese Verbindung verursacht ein Wachstumstopp und Apoptosis von Multiples Myelom (MM)-Zellen durch die Aktivierung des intrinsischen Weges. [9] Es verringert die Lebensfähigkeit von Neuro-2A-Zellen und induziert die Akkumulation von Zellen in der G2/M-Phase des Zellzyklus und anschließende Apoptosis. [10]

Die Verabreichung von SB415286 (~10 mg/kg zweimal täglich) reduziert das Ausmaß und den Grad der durch Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS) hervorgerufenen Dickdarmentzündung bei Ratten und verringert den Gewichtsverlust, was mit einer Herunterregulierung der NF-κB-Aktivität zusammenhängt, die an der Erzeugung proinflammatorischer Mediatoren beteiligt ist. [6] Die Behandlung mit dieser Verbindung bei 1 mg/kg verzögert signifikant das Wachstum von Neuro-2A-Zellen in vivo in Nacktmäusen. [10]

• GSK-3 Aktivitätsassay

  Die GSK-3-Kinaseaktivität wird in Gegenwart verschiedener Konzentrationen von SB415286 in einer Reaktionsmischung gemessen, die folgende Endkonzentrationen enthält: 1 nM humanes GSK3α oder Kaninchen-GSK3α; 50 mM MOPS pH 7,0; 0,2 mM EDTA; 10 mM Mg-Acetat; 7,5 mM L-Mercaptoethanol; 5 % (w/v) Glycerin; 0,01 % (w/v) Tween-20; 10 % (v/v) DMSO; 28 μM GS-2-Peptidsubstrat. Die GS-2-Peptidsequenz entspricht einer Region der Glykogensynthase, die von GSK-3 phosphoryliert wird. Der Assay wird durch die Zugabe von 0,34 μCi [³³P]γ-ATP (IC50-Bestimmungen) oder 2,7 μCi [³³P]γ-ATP (Ki-Bestimmungen) initiiert. Die Gesamt-ATP-Konzentration beträgt 10 μM (IC50-Bestimmungen) oder lag zwischen 0 und 45 μM (Ki-Bestimmungen). Nach 30 Minuten Inkubation bei Raumtemperatur wird der Assay durch Zugabe eines Drittels des Assayvolumens von 2,5 % (v/v) H₃PO₄, das 21 mM ATP enthält, gestoppt. Proben werden auf P30-Phosphocellulosematten aufgetragen, und diese werden sechsmal in 0,5 % (v/v) H₃PO₄ gewaschen. Die Filtermatten werden in Probenbeutel mit Wallac Betaplate Szintillationsflüssigkeit versiegelt. Der Einbau von 33P in das Substratpeptid wird durch Zählen der Matten in einem Wallac Microbeta Szintillationszähler bestimmt.

• Zelllinien

  OPM-2, RPMI-8226, U-266, and INA-6

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Inkubationszeit

  48, or 72 hours

• Methode

  Cells are exposed to different concentrations of SB 415286 for 48 or 72 hours in 96-flat well plates. After 48 or 72 hours, [³H]thymidine is added to the cultures (10 μCi/well) for the last 12 hours. The [³H]thymidine incorporation is evaluated by scintillation counting by using a top count β-counter. Apoptosis is assessed by annexin V/Propidium Iodide staining or by detection of mitochondrial membrane potential. Cell death is evaluated by the analysis of Forward/Side scatter fluorescence changes. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) analysis is performed using a FACS-Calibur Cell Cytometer.

• Tiermodelle

  Male Wistar rats with acute colitis provoked by trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)

• Dosierungen

  ~1 mg/kg

• Verabreichung

  Administered subcutaneously twice daily