SB505124

SB505124 wird als reversibler ATP-kompetitiver und selektiver ALK-Inhibitor von ALK4 und ALK5 identifiziert. Diese Verbindung zeigt bei Konzentrationen von bis zu 100 μM über 48 Stunden keine Toxizität für renale epitheliale A498-Zellen und blockiert die TGF-β-induzierte Apoptose von FaO-Zellen und NRP 154-Zellen auf konzentrationsabhängige Weise. [1] In humanen Nabelschnurvenenendothelzellen (HUVEC) blockiert diese Chemikalie (500 nM) die Veränderungen von TGF-β1 auf die F-Aktin-Assemblierung und verhindert die durch TGF-β induzierte ROS-Produktion. [2] Durch die Hemmung der TGF-beta1-Signalübertragung führt dies zu einer verringerten (DFO)-induzierten Neurogenese. [3] Eine aktuelle Studie zeigt, dass dieser Inhibitor die Migration und Invasion von Brustkrebs-MCF-7-M5-Zellen unterdrückt. [4]

In einem Kaninchen-GFS-Modell senkte SB505124 den intraokularen Druck (IOP) und reduzierte die subkonjunktivale Zellinfiltration und Narbenbildung an der Operationsstelle im GFS. [5] In (TAC)-behandelten Mäusen und FK12EC-KO-Mäusen verhindert diese Verbindung die Aktivierung endothelialer TGF-β-Rezeptoren und die Induktion renaler arteriolarer Hyalinose. [6]

• In-vitro-Proteinkinase-Assay

  Kinase-Assays werden, wie von Laping et al., 2002 beschrieben, unter Verwendung der Kinasedomäne von ALK5 und des vollen N-terminal fusionierten GST-Smad3 durchgeführt. Kinase-Assays werden mit 65 nM GST-ALK5 und 184 nM GST-Smad3 in 50 mM HEPES, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 1 mM Dithiothreitol und 3 μM ATP durchgeführt. Die Reaktionen werden 3 Stunden bei 30 °C mit 0,5 μCi [³³P]γATP inkubiert. Phosphoryliertes Protein wird auf P-81-Papier eingefangen, mit 0,5 %iger Phosphorsäure gewaschen und durch Flüssigkeitsszintillation gezählt. Alternativ wird Smad3- oder Smad1-Protein auch auf FlashPlate Sterile Basic Microplates beschichtet. Kinase-Assays werden dann in FlashPlates mit denselben Assay-Bedingungen unter Verwendung entweder der Kinasedomäne von ALK5 mit Smad3 als Substrat oder der Kinasedomäne von ALK6 (BMP-Rezeptor) mit Smad1 als Substrat durchgeführt. Die Platten werden dreimal mit Phosphatpuffer gewaschen und mit TopCount gezählt.

• Zelllinien

  A498, FaO and NRP 154 cells

• Konzentrationen

  0-10 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Cell viability is measured as described by Laping et al., 2002 or by using the modified tetrazolium salt WST-1. XTT assay: The cells are serum-deprived for 24 hours and then treated with SB505124 for 48 hours to assess the cellular toxicity. Cell viability is determined by incubating cells for 4 hours with XTT labeling and electron coupling reagent according to the manufacturer's directions. Live cells with active mitochondria produce an orange-colored product, formazan, which is detected using a plate reader at between A450 nm and A500 nm with a reference wavelength greater than 600 nm. The absorbance values correlate with the number of viable cells. Modified tetrazolium salt WST-1: Approximately 2000 cells are seeded in 96-well dishes in 100 μL of 0.2% FBS phenol red-free media overnight. The cells are treated with 50 μL of this compound (to achieve the final concentrations indicated) for 30 minutes before being treated with or without TGF-β1 and TNF-α to a final volume of 200 μL. Cell growth is measured at the indicated time points by incubating each well with 10 μL of WST-1 for 3 hours at 37 °C. Metabolically active cells cleave WST-1 to water-soluble formazan, which is directly quantitated with an enzyme-linked immunosorbent assay plate reader. Each experiment is done at least twice, and treatment for each cell line is done in triplicate.

• Tiermodelle

  New Zealand White (NZW) rabbits after glaucoma filtration surgery (GFS).

• Dosierungen

  Tablets containing 5 mg of SB505124.

• Verabreichung

  Administered via p.o.