SGI-1027

SGI-1027 hemmt die DNA-Methylierung durch direkte Hemmung von DNMTs und führt zu einem selektiven Abbau von DNMT1 in einer Vielzahl menschlicher Krebszelllinien. Diese Verbindung zeigt minimale oder keine zytotoxische Wirkung in Rattenhepatozytom H4IIE-Zellen. [1]

Diese Chemikalie (0-100 μM) zeigt eine moderate pro-apoptotische Wirkung auf die menschliche Leukämiezelllinie U937 ohne relevante Veränderungen des Zellzyklus. [2]

SGI-1027 (DNA Methyltransferase Inhibitor II) ist ein DNMT Inhibitor .

• DNA Methyltransferase (CpG Methyltransferase) Assay

  Die DNA-Methylase-Aktivität wird durch Messung des Einbaus einer ³H₁-Methylgruppe aus Ado-Met in DNA mittels DE-81-Ionenaustauschfilterbindungsassay mit einigen Modifikationen bestimmt. Menschliche rekombinante DNMT1, rekombinante Maus-Dnmt3a/Dnmt3b (500 ng) werden mit 500 ng Poly(dI-dC) oder hemimethylierter DNA-Duplex und 75 oder 150 nM (0,275 μCi oder 0,55 μCi) [Methyl-³H]-S-Adenosylmethionin (Ado-Met) in einem Gesamtvolumen von 50 μl bei 37 °C für 1 Stunde inkubiert. Alternativ wird M. Sss I im Puffer des Lieferanten getestet. Jede Reaktion wird doppelt durchgeführt und enthielt Kontrollen ohne Inhibitor oder ohne DNA. Die Reaktion wird gestoppt, indem das Reaktionsgemisch auf eine Whatman DE-81-Ionenaustauschfilterscheibe getropft, gewaschen (fünfmal, jeweils 10 Minuten, mit 0,5 M Na-Phosphatpuffer; pH 7,0), getrocknet und in einem Szintillationszähler gezählt wird. Die Hintergrundradioaktivität (Kontrolle ohne DNA) wird von den Werten subtrahiert, die mit Reaktionsmischungen erhalten wurden, die DNA enthielten, und die Radioaktivität, die in der Reaktion ohne Inhibitor erhalten wurde, wird als 100 % Aktivität betrachtet. Die IC50 wird durch Interpolation aus dem Diagramm des Prozentsatzes der Aktivität gegen die Inhibitorkonzentration bestimmt. Um die Art der Hemmung der DNMTase-Aktivität durch diese Verbindung zu bestimmen, wird die DNMT1-Enzymaktivität in Gegenwart einer festen Konzentration dieser Chemikalie (0, 2,5, 5 und 10 μM) gemessen, während einer der beiden (Ado-Met oder DNA) in einer bestimmten Reaktionsmischung variiert wurde. Bei einer festen Konzentration von DNA (500 ng) wurden variierende Konzentrationen von Ado-Met von 25-500 nM verwendet. Ähnlich wurden die endgültigen DNA-Konzentrationen von (25-500 ng) bei 75 nM Ado-Met variiert.

• Zelllinien

  Rat hepatoma H4IIE cells

• Konzentrationen

  ~300 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Rat hepatoma H4IIE cells are used as the test system. These cells are grown in DMEM supplemented with fetal bovine serum (10%) and calf serum (10%). Cells are seeded into 96-well plates and after 48 h exposed to SGI-1027 at concentrations ranging from 0 to 300 µmol/L. The solubility is determined by Nephalometry techniques immediately after dosing and before harvesting the cells at 24 h. Following the exposure period, the cells or their supernatant (culture medium) are analyzed for changes in cell proliferation (propidium iodide), membrane leakage (α-GST), mitochondrial function [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide and cellular ATP], oxidative stress (intracellular GSH and 8-isoprostane), and apoptosis. The half-maximal toxic concentration (TC50) is determined from the dose-response curves.

• Tiermodelle

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosierungen

  11.2 mg/kg

• Verabreichung

  i.p.